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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 琼脂凝胶电泳，DNA条带特别模糊，原因？
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110370210

铜虫 (著名写手)

[求助] 琼脂凝胶电泳，DNA条带特别模糊，原因？ 已有2人参与

如题，上样缓冲液6X溴芬蓝和蔗糖，样品5微升，上样缓冲液1微升，甘油2微升，以前这样做，条带可清晰了，可最近几次，都特模糊，屡战屡败，制胶什么的也和以前一样啊，开始怀疑上样缓冲液的问题，重新配了，还是模糊，电泳用的电解质缓冲液也是前些日子配的，没有沉淀。那问题出在哪呢？急求高手指教。

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1楼 2016-06-28 23:22:07
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原海亮

木虫 (著名写手)
来张图吧

发自小木虫Android客户端
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天空才是极限，我有信心飞的更高！
2楼2016-06-28 23:24:26
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110370210

铜虫 (著名写手)
忘记说了，我制胶时加了5微升EB，

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3楼2016-06-28 23:36:23
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110370210

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-06-28 23:24:26
来张图吧

明天我把图片传上来哈。

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4楼2016-06-28 23:37:08
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110370210

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-06-28 23:24:26
来张图吧

第一个是换了新的电泳工作液后的，很不清晰。第二个是以前我做的，操作完全一样。
琼脂凝胶电泳，DNA条带特别模糊，原因？
2016.6.27-3.jpg


琼脂凝胶电泳，DNA条带特别模糊，原因？-1
jz2016.5.2-1.jpg
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5楼2016-06-29 11:19:33
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

感觉你的模板降解的厉害，不过我也怀疑你的酶有问题，换下新的酶，重新提模板试试吧
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奋斗是我们前进的动力！
6楼2016-07-02 11:02:08
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110370210

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xn8008 at 2016-07-02 11:02:08
感觉你的模板降解的厉害，不过我也怀疑你的酶有问题，换下新的酶，重新提模板试试吧

请问“”模板降解的厉害“”是什么意思呢？我的这个是做高分子基因载体的，高分子键断裂，释放DNA的，用电泳验证
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7楼2016-07-02 21:50:12
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 110370210 at 2016-07-02 21:50:12
请问“”模板降解的厉害“”是什么意思呢？我的这个是做高分子基因载体的，高分子键断裂，释放DNA的，用电泳验证...

你的PCR利用的DNA已经出现降解了，不要认为只有RNA存在降解，空气里的DNA酶也可以把DNA降解
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奋斗是我们前进的动力！
8楼2016-07-02 22:19:32
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110370210

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xn8008 at 2016-07-02 22:19:32
你的PCR利用的DNA已经出现降解了，不要认为只有RNA存在降解，空气里的DNA酶也可以把DNA降解...

可是DNA我和之前用的完全一样，而且用完后的DNA立即冻存的。您说的PCR是什么不太懂？我这个第一个条带是裸DNA，其余的都加了高分子复合DNA的
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9楼2016-07-04 10:20:11
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Kinmn

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你可以把Mark点上，看Mark条带清不清晰，再做判断，可能凝胶成像仪有问题或者图片没拍好
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10楼2016-07-04 10:51:50
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