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RT-PCR失败很多次，什么原因呢？ 已有1人参与
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新虫一只，请各位有经验的师兄师姐前来莅临指导！~~ 这是我跑的RNA电泳条带，不是说应该有三条带吗？我怎么只有两条呢？RNA质量怎么样啊？能用于反转录吗？我用博迈德植物EASYspin试剂盒提的，后来用eppendorf photometer plus 测的浓度稀释2+198微升，稀释100倍，但OD值不太正常，什么原因造成的呢，我反转录后pcr，都P不出来又有可能是什么原因呢？引物我用过很多次，没问题啊，我做RT-PCR体系时，为了把模板浓度混匀，加之前用枪吹吸了几次，会不会把cDNA弄断了？反转录用的天根的FastQuant RT Kit，cDNA加了0到4微升都P不出来，说明跟模板量没关，退火温度也做了梯度51-57℃，也没关，可是为什么P不出来啊，是反转录失败吗？会是RNA提取时有巯基乙醇或乙醇残留的原因吗？重点是OD值不正常啊，怎么看OD值啊？  第一次提的RNA.jpg  左边是RTPCR,右是新提的RNA.jpg  反转录后的cDNA浓度.jpg  反转录后的cDNA浓度.jpg  反转录后的cDNA浓度.jpg  反转录后的cDNA浓度.jpg  RNA浓度.jpg  RNA浓度.jpg  RNA浓度.jpg  RNA浓度.jpg |
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kaobo2012
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2楼2016-06-21 21:55:36
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3楼2016-06-22 09:13:40
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4楼2016-06-22 09:42:04
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rna没降解就只有两条，没有5s的话质量很好，但是用试剂盒提取有个问题，有些试剂盒会把降解的rna过滤掉，所以给人错觉提得不错，我还是喜欢用trizol提，可以看清楚材料的质量，你的浓度可以的，不过你的260比280，260比230的数值好怪异 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2016-06-25 10:00:37
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