| 查看: 2572 | 回复: 4 | ||
[求助]
RT-PCR失败很多次，什么原因呢？ 已有1人参与
|
|
新虫一只，请各位有经验的师兄师姐前来莅临指导！~~ 这是我跑的RNA电泳条带，不是说应该有三条带吗？我怎么只有两条呢？RNA质量怎么样啊？能用于反转录吗？我用博迈德植物EASYspin试剂盒提的，后来用eppendorf photometer plus 测的浓度稀释2+198微升，稀释100倍，但OD值不太正常，什么原因造成的呢，我反转录后pcr，都P不出来又有可能是什么原因呢？引物我用过很多次，没问题啊，我做RT-PCR体系时，为了把模板浓度混匀，加之前用枪吹吸了几次，会不会把cDNA弄断了？反转录用的天根的FastQuant RT Kit，cDNA加了0到4微升都P不出来，说明跟模板量没关，退火温度也做了梯度51-57℃，也没关，可是为什么P不出来啊，是反转录失败吗？会是RNA提取时有巯基乙醇或乙醇残留的原因吗？重点是OD值不正常啊，怎么看OD值啊？  第一次提的RNA.jpg  左边是RTPCR,右是新提的RNA.jpg  反转录后的cDNA浓度.jpg  反转录后的cDNA浓度.jpg  反转录后的cDNA浓度.jpg  反转录后的cDNA浓度.jpg  RNA浓度.jpg  RNA浓度.jpg  RNA浓度.jpg  RNA浓度.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有262人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 一种比较详细的PCR技术
已经有10人回复
kaobo2012
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 100 (初中生)
- 金币: 5426.6
- 散金: 200
- 红花: 15
- 帖子: 731
- 在线: 255.3小时
- 虫号: 1168995
- 注册: 2010-12-13
- 专业: 抗体工程学
2楼2016-06-21 21:55:36
biotech_zhou
木虫 (著名写手)
待人以诚：专业/专注/专心
- 应助: 373 (硕士)
- 金币: 2037.6
- 散金: 206
- 红花: 6
- 帖子: 1441
- 在线: 317.6小时
- 虫号: 3078402
- 注册: 2014-03-21
- 性别: GG
- 专业: 免疫生物学
3楼2016-06-22 09:13:40
star013 
新虫 (知名作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1488.5
- 散金: 831
- 红花: 33
- 帖子: 5395
- 在线: 493.3小时
- 虫号: 1401381
- 注册: 2011-09-14
- 专业: 法学
4楼2016-06-22 09:42:04
|
rna没降解就只有两条，没有5s的话质量很好，但是用试剂盒提取有个问题，有些试剂盒会把降解的rna过滤掉，所以给人错觉提得不错，我还是喜欢用trizol提，可以看清楚材料的质量，你的浓度可以的，不过你的260比280，260比230的数值好怪异 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2016-06-25 10:00:37