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夜影行风

新虫 (初入文坛)

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虫号: 2625073
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专业: 环境微生物学

[求助] 质粒提取已有3人参与

我之前从别的老师那接了JM109，我所需要的目的基因在其质粒上（Amp抗性），经摇菌并用20%甘油保存、试剂盒提取、1%琼脂糖凝胶电泳显示单一条带（约2500bp），目的基因能扩增出来。但是过了近一个月，我再用之前保存的甘油菌划线、摇菌、试剂盒提取质粒、1%琼脂糖凝胶电泳显示单一条带（近6000bp）。那么问题来了，同一株菌种提取得到的质粒大小竟然不一样，我又做了几次重复，提取出来的质粒大小都是近6000bp，都能扩增出来我所需要的目的基因！我不知道这是什么原因造成的？求大神解答！谢谢！

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1楼 2016-06-21 16:38:01

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diy患者

铁虫 (正式写手)

应助: 11 (小学生)
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专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 鼓励积极讨论 2016-06-22 06:55:44

1.如果连入外源基因，不大可能2500bp，一般来说；。puc18算是很小的了，也有2.7kb，所以你第一看到的是超螺旋状态，至于大小，肯定比2500大。
2.一般我们提取质粒，看到的是超螺旋的，如果放置时间过长，也可能产生，解螺旋的，也就是好开环的，电泳速度低，但基本不会全部变成解螺旋的。

两次看到的大小不同，个人感觉不大可能是因为构想导致，可能是质粒在大肠杆菌体内形成了二聚体，但这种情况，只是听说过，没有见过。

先进行单酶切看看。