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夜影行风

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒提取已有3人参与

我之前从别的老师那接了JM109,我所需要的目的基因在其质粒上(Amp抗性),经摇菌并用20%甘油保存、试剂盒提取、1%琼脂糖凝胶电泳显示单一条带(约2500bp),目的基因能扩增出来。但是过了近一个月,我再用之前保存的甘油菌划线、摇菌、试剂盒提取质粒、1%琼脂糖凝胶电泳显示单一条带(近6000bp)。那么问题来了,同一株菌种提取得到的质粒大小竟然不一样,我又做了几次重复,提取出来的质粒大小都是近6000bp,都能扩增出来我所需要的目的基因!我不知道这是什么原因造成的?求大神解答!谢谢!
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夜影行风

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 选择远方523 at 2016-06-21 17:27:07
正常,你单酶切一下再检测。

正常?能说一下可能的原因吗?
3楼2016-06-21 17:32:02
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选择远方523

新虫 (初入文坛)

正常,你单酶切一下再检测。

发自小木虫IOS客户端
2楼2016-06-21 17:27:07
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选择远方523

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 夜影行风 at 2016-06-21 17:32:02
正常?能说一下可能的原因吗?...

可能是两个质粒重组了,这事我也遇到过,用酶切一下再看就好了

发自小木虫IOS客户端
4楼2016-06-21 17:33:06
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 金币+1, MolEPI+1, 应助指数+1, 鼓励积极讨论 2016-06-22 06:55:35
正常情况下,质粒是环状的。你提取时,试剂及外力,会对它破坏作用。所以提取出来的质粒,会有环状、开环、线状,三种状态。而每次提取时,这三种状态的比例,是不断变化的。所以一般都用单酶、或双酶切作进一步的鉴定。当然,也有用快而经济的PCR方法来鉴定,这种方法有假阳性的可能。
5楼2016-06-21 21:50:04
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