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宏伟10

银虫 (小有名气)

[交流] 质粒重组挑取的单克隆出现各种不同质粒,求解? 已有8人参与

连接时设置无目的片段两个对照(载体加酶&载体无酶),转化后均无菌落,而实验组出现很多菌落。单菌落酶切验证,like this。各位有出现过这种情况吗?是什么原因?(最后一条带是载体大小)

质粒重组挑取的单克隆出现各种不同质粒,求解?
单菌落验证.jpg
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开心是福
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香,谢谢你的理解与支持。祝您科研顺利,文章多多。 2016-06-21 00:05:33
xn8008: 应助指数+1 2016-06-21 08:43:54
xn8008: 应助指数+1 2016-06-23 06:28:04
1) 这种东西没有什么可讨论的,目的片段再纯(切胶回收)的片段,连上载体后用通用引物鉴定都能鉴定出一大堆乱七八糟的插入的。你能说清这些是什么东西吗?
2) 以我当年某师弟的实验作风,不带手套的做实验,做出来的插入片段经测序是人手上某蛋白的编码基因(我们是做植物的),所以纠结这种事没有任何意义,你所确保的是,单克隆里有你的正确片段就行。
Let God do with it as He wills
2楼2016-06-20 20:26:06
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闲来小译

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎积极交流 2016-06-21 08:44:05
胶跑得非常漂亮~
3楼2016-06-21 03:26:25
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普通回帖

lizi7952

荣誉版主 (文坛精英)

我是一只小小小小虫

文献杰出贡献优秀版主


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
xn8008: 应助指数+1 2016-06-21 08:44:15
连接之前的酶切可能有问题吧,切的乱七八糟的,但又能连起来,之前也有这样的情况,送一堆去测序,都没好的。个人看法。

发自小木虫IOS客户端
发帖前,请搜索先。http://emuch.net/search/
4楼2016-06-21 06:50:33
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virus510

禁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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5楼2016-06-21 07:51:27
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宏伟10

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by virus510 at 2016-06-21 07:51:27
连接之后还是就一个酶切位点吗,目的片段多大

连接之后用于验证的酶是两个酶切位点。目的片段1900bp
开心是福
6楼2016-06-21 23:41:36
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宏伟10

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lizi7952 at 2016-06-21 06:50:33
连接之前的酶切可能有问题吧,切的乱七八糟的,但又能连起来,之前也有这样的情况,送一堆去测序,都没好的。个人看法。

关键是片段变得比载体本身短了。如果连有东西应该不会短啊
开心是福
7楼2016-06-21 23:43:12
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宏伟10

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2016-06-20 20:26:06
1) 这种东西没有什么可讨论的,目的片段再纯(切胶回收)的片段,连上载体后用通用引物鉴定都能鉴定出一大堆乱七八糟的插入的。你能说清这些是什么东西吗?
2) 以我当年某师弟的实验作风,不带手套的做实验,做出来 ...

神奇的是酶切片段变得比载体本身短了。质粒变短了。
开心是福
8楼2016-06-21 23:44:10
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华人科学网

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2016-06-20 20:26:06
1) 这种东西没有什么可讨论的,目的片段再纯(切胶回收)的片段,连上载体后用通用引物鉴定都能鉴定出一大堆乱七八糟的插入的。你能说清这些是什么东西吗?
2) 以我当年某师弟的实验作风,不带手套的做实验,做出来 ...

手上蛋白基因。。。。学习了

发自小木虫Android客户端
9楼2016-06-22 00:18:17
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kaoyanjiu

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2016-06-20 20:26:06
1) 这种东西没有什么可讨论的,目的片段再纯(切胶回收)的片段,连上载体后用通用引物鉴定都能鉴定出一大堆乱七八糟的插入的。你能说清这些是什么东西吗?
2) 以我当年某师弟的实验作风,不带手套的做实验,做出来 ...

第二点6懵了

发自小木虫IOS客户端
10楼2016-06-23 00:18:56
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