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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒重组挑取的单克隆出现各种不同质粒，求解？
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宏伟10

银虫 (小有名气)

[交流] 质粒重组挑取的单克隆出现各种不同质粒，求解？ 已有8人参与

连接时设置无目的片段两个对照（载体加酶&载体无酶），转化后均无菌落，而实验组出现很多菌落。单菌落酶切验证，like this。各位有出现过这种情况吗？是什么原因？（最后一条带是载体大小）

质粒重组挑取的单克隆出现各种不同质粒，求解？
单菌落验证.jpg
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开心是福
1楼 2016-06-20 20:06:15
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★ ★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。祝您科研顺利，文章多多。 2016-06-21 00:05:33
xn8008: 应助指数+1 2016-06-21 08:43:54
xn8008: 应助指数+1 2016-06-23 06:28:04
1) 这种东西没有什么可讨论的，目的片段再纯（切胶回收）的片段，连上载体后用通用引物鉴定都能鉴定出一大堆乱七八糟的插入的。你能说清这些是什么东西吗？
2) 以我当年某师弟的实验作风，不带手套的做实验，做出来的插入片段经测序是人手上某蛋白的编码基因（我们是做植物的），所以纠结这种事没有任何意义，你所确保的是，单克隆里有你的正确片段就行。
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Let God do with it as He wills
2楼2016-06-20 20:26:06
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闲来小译

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎积极交流 2016-06-21 08:44:05
胶跑得非常漂亮~
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3楼2016-06-21 03:26:25
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普通回帖

lizi7952

荣誉版主 (文坛精英)

我是一只小小小小虫

文献杰出贡献优秀版主
★
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xn8008: 应助指数+1 2016-06-21 08:44:15
连接之前的酶切可能有问题吧，切的乱七八糟的，但又能连起来，之前也有这样的情况，送一堆去测序，都没好的。个人看法。

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发帖前，请搜索先。http://emuch.net/search/
4楼2016-06-21 06:50:33
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virus510

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
5楼2016-06-21 07:51:27
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宏伟10

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by virus510 at 2016-06-21 07:51:27
连接之后还是就一个酶切位点吗，目的片段多大

连接之后用于验证的酶是两个酶切位点。目的片段1900bp
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开心是福
6楼2016-06-21 23:41:36
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宏伟10

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lizi7952 at 2016-06-21 06:50:33
连接之前的酶切可能有问题吧，切的乱七八糟的，但又能连起来，之前也有这样的情况，送一堆去测序，都没好的。个人看法。

关键是片段变得比载体本身短了。如果连有东西应该不会短啊
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开心是福
7楼2016-06-21 23:43:12
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宏伟10

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2016-06-20 20:26:06
1) 这种东西没有什么可讨论的，目的片段再纯（切胶回收）的片段，连上载体后用通用引物鉴定都能鉴定出一大堆乱七八糟的插入的。你能说清这些是什么东西吗？
2) 以我当年某师弟的实验作风，不带手套的做实验，做出来 ...

神奇的是酶切片段变得比载体本身短了。质粒变短了。
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开心是福
8楼2016-06-21 23:44:10
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华人科学网

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2016-06-20 20:26:06
1) 这种东西没有什么可讨论的，目的片段再纯（切胶回收）的片段，连上载体后用通用引物鉴定都能鉴定出一大堆乱七八糟的插入的。你能说清这些是什么东西吗？
2) 以我当年某师弟的实验作风，不带手套的做实验，做出来 ...

手上蛋白基因。。。。学习了

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9楼2016-06-22 00:18:17
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kaoyanjiu

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2016-06-20 20:26:06
1) 这种东西没有什么可讨论的，目的片段再纯（切胶回收）的片段，连上载体后用通用引物鉴定都能鉴定出一大堆乱七八糟的插入的。你能说清这些是什么东西吗？
2) 以我当年某师弟的实验作风，不带手套的做实验，做出来 ...

第二点6懵了

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10楼2016-06-23 00:18:56
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