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宏伟10

银虫 (小有名气)

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[交流] 质粒重组挑取的单克隆出现各种不同质粒，求解？已有8人参与

连接时设置无目的片段两个对照（载体加酶&载体无酶），转化后均无菌落，而实验组出现很多菌落。单菌落酶切验证，like this。各位有出现过这种情况吗？是什么原因？（最后一条带是载体大小）

单菌落验证.jpg

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开心是福

1楼 2016-06-20 20:06:15

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宏伟10

银虫 (小有名气)

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引用回帖:

13楼: Originally posted by 千里单骑妙 at 2016-06-24 09:29:00
当年我在一个7K的质粒上再插片段就出现过这种情况

怎么解决的呢？我的也是7k

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开心是福

16楼2016-06-25 15:36:19

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查看全部 16 个回答

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆不喜欢发脾气

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★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。祝您科研顺利，文章多多。 2016-06-21 00:05:33
xn8008: 应助指数+1 2016-06-21 08:43:54
xn8008: 应助指数+1 2016-06-23 06:28:04

1) 这种东西没有什么可讨论的，目的片段再纯（切胶回收）的片段，连上载体后用通用引物鉴定都能鉴定出一大堆乱七八糟的插入的。你能说清这些是什么东西吗？
2) 以我当年某师弟的实验作风，不带手套的做实验，做出来的插入片段经测序是人手上某蛋白的编码基因（我们是做植物的），所以纠结这种事没有任何意义，你所确保的是，单克隆里有你的正确片段就行。

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Let God do with it as He wills

2楼2016-06-20 20:26:06

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