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jonasfan

银虫 (小有名气)

[求助] 蛋白与小分子相互作用 已有2人参与

各位大神,我想测定小分子与蛋白是否有结合,预测是一种非共价结合作用,不知道除了SPR之外还有哪些测定方法呢?由于是弱的相互作用,不知道电泳是否合适呢,是否可以区分出几百至一两千的分子量差异?另外,据说小分子若与蛋白有结合,会使蛋白的熔点升高?以上,谢谢。。。
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brightfuture01

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jonasfan: 金币+15, ★★★★★最佳答案, 有两位都给了很好的答案,所以一半一半吧,见谅! 2016-06-22 10:56:32
相互作用比较弱的话,用电泳这样不敏感的技术肯定是不行的。我觉得如果蛋白稳定的话,可以考虑做ITC,摸索一下两者之间的浓度比,应该问题不大。祝实验顺利。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2016-06-21 00:55:16
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wochong

新虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jonasfan: 金币+15, 有两位都给了很好的答案,所以一半一半吧,见谅 2016-06-22 10:56:01
分子间相互作用的话,最好的当然是Fortebio 相互作用测定了 是特别针对小分子和蛋白的相互作用测定 我们实验室上次制备了重组蛋白和一个小分子去做相互作用 不仅得到了两者有相互作用 仪器自己得出一张表 是详细的亲和力强弱 大小  信息很详细  这种方法目前在国内还不是很流行 仪器也很贵,国内有公司提供Fortebio分子间相互作用测定服务 但是不多 有公司提供类似的BIAcore 相互作用测定的,但是效果没有Fortebio好,通量也不及它  呵呵 如果你有什么问题可以问我~
希望对你有帮助~
2楼2016-06-20 16:38:55
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brightfuture01

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【答案】应助回帖

漏回了几句,如果小分子结合之后蛋白构象发生了较大的变化的话,是可以用Native-PAGE检测的。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2016-06-21 00:58:02
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jonasfan

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wochong at 2016-06-20 16:38:55
分子间相互作用的话,最好的当然是Fortebio 相互作用测定了 是特别针对小分子和蛋白的相互作用测定 我们实验室上次制备了重组蛋白和一个小分子去做相互作用 不仅得到了两者有相互作用 仪器自己得出一张表 是详细的亲 ...

您好!非常感谢您的回复。有几点详细信息想深入了解下。我的蛋白分子量只有6KD左右,而且小分子与蛋白的作用力可能很弱,所以这样的体系也可以做是吗?
5楼2016-06-22 11:02:24
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