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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白与小分子相互作用
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jonasfan

银虫 (小有名气)

[求助] 蛋白与小分子相互作用 已有2人参与

各位大神，我想测定小分子与蛋白是否有结合，预测是一种非共价结合作用，不知道除了SPR之外还有哪些测定方法呢？由于是弱的相互作用，不知道电泳是否合适呢，是否可以区分出几百至一两千的分子量差异？另外，据说小分子若与蛋白有结合，会使蛋白的熔点升高？以上，谢谢。。。
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1楼 2016-06-20 13:00:52
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wochong

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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jonasfan: 金币+15, 有两位都给了很好的答案，所以一半一半吧，见谅 2016-06-22 10:56:01
分子间相互作用的话，最好的当然是Fortebio 相互作用测定了 是特别针对小分子和蛋白的相互作用测定 我们实验室上次制备了重组蛋白和一个小分子去做相互作用 不仅得到了两者有相互作用 仪器自己得出一张表 是详细的亲和力强弱 大小  信息很详细  这种方法目前在国内还不是很流行 仪器也很贵，国内有公司提供Fortebio分子间相互作用测定服务 但是不多 有公司提供类似的BIAcore 相互作用测定的，但是效果没有Fortebio好，通量也不及它  呵呵 如果你有什么问题可以问我~
希望对你有帮助~
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2楼2016-06-20 16:38:55
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brightfuture01

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【答案】应助回帖

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jonasfan: 金币+15, ★★★★★最佳答案, 有两位都给了很好的答案，所以一半一半吧，见谅！ 2016-06-22 10:56:32
相互作用比较弱的话，用电泳这样不敏感的技术肯定是不行的。我觉得如果蛋白稳定的话，可以考虑做ITC，摸索一下两者之间的浓度比，应该问题不大。祝实验顺利。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2016-06-21 00:55:16
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brightfuture01

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【答案】应助回帖

漏回了几句，如果小分子结合之后蛋白构象发生了较大的变化的话，是可以用Native-PAGE检测的。
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4楼2016-06-21 00:58:02
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jonasfan

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wochong at 2016-06-20 16:38:55
分子间相互作用的话，最好的当然是Fortebio 相互作用测定了 是特别针对小分子和蛋白的相互作用测定 我们实验室上次制备了重组蛋白和一个小分子去做相互作用 不仅得到了两者有相互作用 仪器自己得出一张表 是详细的亲 ...

您好！非常感谢您的回复。有几点详细信息想深入了解下。我的蛋白分子量只有6KD左右，而且小分子与蛋白的作用力可能很弱，所以这样的体系也可以做是吗？
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5楼2016-06-22 11:02:24
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jonasfan

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by brightfuture01 at 2016-06-21 00:58:02
漏回了几句，如果小分子结合之后蛋白构象发生了较大的变化的话，是可以用Native-PAGE检测的。

谢谢！我之前有用圆二色谱检测过蛋白的二级结构，发现是没有改变的，应该是蛋白构象没有改变吧？ITC是什么实验呢？要怎么做呀？
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6楼2016-06-22 11:04:09
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wochong

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jonasfan at 2016-06-22 11:02:24
您好！非常感谢您的回复。有几点详细信息想深入了解下。我的蛋白分子量只有6KD左右，而且小分子与蛋白的作用力可能很弱，所以这样的体系也可以做是吗？...

当然可以，做相互作用而且你这个还弱，当然是fortebio,你是还不了解这个技术，这个实验做出来的话是得到具体的数值，数值哦，具体都几点几的当然准确了，比任何研究相互作用的方法都准确严谨，只是在国内没有流行，做的人少仪器超贵，所以在国外流行，国内研究相互作用的最多的是有pull down 或者酵母双杂交等

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7楼2016-06-23 20:58:37
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brightfuture01

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6楼: Originally posted by jonasfan at 2016-06-22 11:04:09
谢谢！我之前有用圆二色谱检测过蛋白的二级结构，发现是没有改变的，应该是蛋白构象没有改变吧？ITC是什么实验呢？要怎么做呀？...

ITC,Isothermal titration calorimetry，可以自己搜一下。需要纯化好的蛋白和小分子，当然还要ITC的仪器，国内很多家科研院所都有。
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8楼2016-06-26 13:50:42
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坏蛋不2

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wochong at 2016-06-24 00:58:37
当然可以，做相互作用而且你这个还弱，当然是fortebio,你是还不了解这个技术，这个实验做出来的话是得到具体的数值，数值哦，具体都几点几的当然准确了，比任何研究相互作用的方法都准确严谨，只是在国内没有流行， ...

不仅如此，做BLI的sensor很贵。。。国内仪器真的不是很多
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药化药化
9楼2016-07-12 20:40:56
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wochong

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 坏蛋不2 at 2016-07-12 20:40:56
不仅如此，做BLI的sensor很贵。。。国内仪器真的不是很多...

哈哈我们可以做(⊙o⊙)哦有仪器，不过确实比较贵，别人过来做的话收费也是很高的

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10楼2016-07-14 12:21:12
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