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妖小七

新虫 (小有名气)

[交流] 定点突变一个氨基酸,连接到表达载体上测序,发现变回了突变前的序列了

重叠PCR做定点突变,序列先连接到T载体上,测序正确,然后连接到表达载体30a上,测序发现突变点变回了没突变前的。重新测序连接T的质粒,确定是突变了,然后重新连接30a,仍然变回原来的序列。有没有人遇到这样的情况,要怎么解决?求大神帮助。
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象牙白

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我最近也在做同样的实验,为什么不一开始就连到30a上呢?是不是两个载体所处的体系不同,导致了基因的自我修复。
小元,加油!
2楼2016-07-13 22:22:01
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我想问一下,你的突变位点距离你的引物远么
奋斗是我们前进的动力!
3楼2016-07-13 22:49:22
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妖小七

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 象牙白 at 2016-07-13 22:22:01
我最近也在做同样的实验,为什么不一开始就连到30a上呢?是不是两个载体所处的体系不同,导致了基因的自我修复。

直接连接表达载体成功率低,连不太上

发自小木虫Android客户端
4楼2016-07-14 11:29:19
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