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妖小七

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[交流] 定点突变一个氨基酸，连接到表达载体上测序，发现变回了突变前的序列了

重叠PCR做定点突变，序列先连接到T载体上，测序正确，然后连接到表达载体30a上，测序发现突变点变回了没突变前的。重新测序连接T的质粒，确定是突变了，然后重新连接30a，仍然变回原来的序列。有没有人遇到这样的情况，要怎么解决？求大神帮助。

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1楼 2016-06-20 11:23:13

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象牙白

银虫 (小有名气)

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我最近也在做同样的实验，为什么不一开始就连到30a上呢？是不是两个载体所处的体系不同，导致了基因的自我修复。

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小元，加油！

2楼2016-07-13 22:22:01

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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

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我想问一下，你的突变位点距离你的引物远么

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奋斗是我们前进的动力！

3楼2016-07-13 22:49:22

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妖小七

新虫 (小有名气)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 象牙白 at 2016-07-13 22:22:01
我最近也在做同样的实验，为什么不一开始就连到30a上呢？是不是两个载体所处的体系不同，导致了基因的自我修复。

直接连接表达载体成功率低，连不太上

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4楼2016-07-14 11:29:19

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