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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 质粒提取
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shigm1121

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒提取

各位亲友：我在做转基因，构建好的表达载体，导入到DH5α扩大培养，菌液PCR有目标条带，在Kan环境下可以生长，但是为什么提取不到质粒。
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1楼 2016-06-20 08:09:35
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ssswzf

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
实验操作没有问题的话，看看是不是试剂盒有问题，看看碱裂解液的ph怎么样，悬浮液中RNA酶是否失效
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2楼2016-06-20 08:55:08
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sangtian

新虫 (初入文坛)
看看是不是提质粒过程中出现的问题，用的试剂盒还是自己配置的溶液I，溶液II

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3楼2016-06-20 09:24:33
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yvonne9044

新虫 (正式写手)
做个对照 看能不能提出来，提不出来就是试剂盒或者溶液的问题，菌液摇的混浊点～

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4楼2016-06-20 10:00:20
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raopian

新虫 (初入文坛)
存在一种情况是，有污染，菌液PCR有产物，但是摇菌浓度浅甚至摇不出来~~提质粒当然摇不出来~~你做菌液PCR的时候最好做一个阴性对照亲，有的时候水都能P出来～～～排除你的引物，酶，缓冲液，等一切试剂都没有污染～～～
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5楼2016-06-21 20:23:37
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shigm1121

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sangtian at 2016-06-20 09:24:33
看看是不是提质粒过程中出现的问题，用的试剂盒还是自己配置的溶液I，溶液II

用的试剂盒
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6楼2016-07-10 11:27:27
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shigm1121

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by raopian at 2016-06-21 20:23:37
存在一种情况是，有污染，菌液PCR有产物，但是摇菌浓度浅甚至摇不出来~~提质粒当然摇不出来~~你做菌液PCR的时候最好做一个阴性对照亲，有的时候水都能P出来～～～排除你的引物，酶，缓冲液，等一切试剂都没有污染～ ...

谢谢了
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7楼2016-07-10 11:28:52
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summer994

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

菌液PCR有目标条带，在Kan环境下可以生长，证明质粒存在，卡那下可以生长，说明含该抗性质粒的菌大量存在，同时出现你说的两个条件，我认为菌液没有问题的可能性最大。出问题应该在质粒提取环节，你好好检查一下
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8楼2016-07-12 17:05:01
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MMCCBB

新虫 (著名写手)
你可以换培养基试试

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9楼2016-07-20 20:54:17
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pangadmire

铁虫 (小有名气)
摇菌摇浑再提试试

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10楼2016-07-24 01:00:18
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