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shigm1121

新虫 (初入文坛)

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[求助] 质粒提取

各位亲友：我在做转基因，构建好的表达载体，导入到DH5α扩大培养，菌液PCR有目标条带，在Kan环境下可以生长，但是为什么提取不到质粒。

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1楼 2016-06-20 08:09:35

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ssswzf

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容

实验操作没有问题的话，看看是不是试剂盒有问题，看看碱裂解液的ph怎么样，悬浮液中RNA酶是否失效

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2楼2016-06-20 08:55:08

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sangtian

新虫 (初入文坛)

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专业: 基因表达调控与表观遗传学

看看是不是提质粒过程中出现的问题，用的试剂盒还是自己配置的溶液I，溶液II

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3楼2016-06-20 09:24:33

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yvonne9044

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做个对照看能不能提出来，提不出来就是试剂盒或者溶液的问题，菌液摇的混浊点～

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4楼2016-06-20 10:00:20

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raopian

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存在一种情况是，有污染，菌液PCR有产物，但是摇菌浓度浅甚至摇不出来~~提质粒当然摇不出来~~你做菌液PCR的时候最好做一个阴性对照亲，有的时候水都能P出来～～～排除你的引物，酶，缓冲液，等一切试剂都没有污染～～～

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5楼2016-06-21 20:23:37

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shigm1121

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3楼: Originally posted by sangtian at 2016-06-20 09:24:33
看看是不是提质粒过程中出现的问题，用的试剂盒还是自己配置的溶液I，溶液II

用的试剂盒

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6楼2016-07-10 11:27:27

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shigm1121

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5楼: Originally posted by raopian at 2016-06-21 20:23:37
存在一种情况是，有污染，菌液PCR有产物，但是摇菌浓度浅甚至摇不出来~~提质粒当然摇不出来~~你做菌液PCR的时候最好做一个阴性对照亲，有的时候水都能P出来～～～排除你的引物，酶，缓冲液，等一切试剂都没有污染～ ...

谢谢了

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7楼2016-07-10 11:28:52

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