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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 蛋白就是搞不出来！急，关键！
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

[求助] 蛋白就是搞不出来！急，关键！ 已有2人参与

包涵体蛋白。
透析之前检测有条带，透析之后检测有条带，过柱子之后检测无条带，证明蛋白已经挂在了GST柱子上。
用elution buf+谷胱甘肽 洗脱，检测，什么都没有？？？？？没洗掉？浓度低？
往后想做western，蛋白搞不出来，好急啊
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1楼 2016-06-19 22:09:27
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wxy_0808

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 应助指数+1 2016-06-21 15:26:31
洗脱后检测不到，没有洗脱下来可能性更大，调整梯度洗脱试试。
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2楼2016-06-21 09:02:12
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wxy_0808 at 2016-06-21 09:02:12
洗脱后检测不到，没有洗脱下来可能性更大，调整梯度洗脱试试。

意思就是我把谷胱甘肽的浓度加大了？我现在用的是10mM，最多可以用多少的呢？

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3楼2016-06-21 12:54:56
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

xn8008: 应助指数+1 2016-06-21 15:26:36
直接先把柱子煮了直接上胶
先证明柱子上有蛋白，在证明是洗脱液的事
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Let God do with it as He wills
4楼2016-06-21 14:43:45
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star013

新虫 (知名作家)
我们可以帮您分离纯化

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5楼2016-06-21 17:18:31
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匿名

用户注销 (小有名气)
★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-23 06:51:12
本帖仅楼主可见
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6楼2016-06-22 16:59:27
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凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 再点一根烟 at 2016-06-22 16:59:27
你不用percission protease 切GST标签的么？我现在也在用GST纯化，取的上清，挂柱后用percission protease过夜切，然后用300mM NaCl 洗脱，得率还可以。

现在只想先把他纯化出来，切的话再说。
就是一直纯不出来

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7楼2016-06-22 17:11:05
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MeiPD

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by star013 at 2016-06-21 17:18:31
我们可以帮您分离纯化

你好，你们可以做蛋白纯化吗？

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8楼2017-12-18 19:05:55
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