| 查看: 1506 | 回复: 5 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
凯伦爱佳佳金虫 (正式写手)
|
[求助]
GST蛋白纯化 已有2人参与
|
||
|
我三个蛋白，检测分别在上清和包涵体。 上清直接过GST柱子，结果跑胶什么都没有。 包涵体用曲拉通、脲变性、透析复性过之后，总有白色物质析出，过GST住之后跑胶也是什么都没有。 不知道主要出错在哪一步啊？ 我的透析袋是14000的，目的蛋白50000的。 |
回复此楼» 猜你喜欢
334分 一志愿武理 材料求调剂
已经有7人回复
-
275求调剂
已经有18人回复
-
环境工程 085701，267求调剂
已经有6人回复
-
070305高分子化学与物理 304分求调剂
已经有12人回复
-
材料与化工272求调剂
已经有12人回复
-
277跪求调剂
已经有10人回复
-
化学工程085602 305分求调剂
已经有19人回复
-
一志愿北京化工大学材料与化工（085600）296求调剂
已经有15人回复
-
085600 286分 材料求调剂
已经有9人回复
-
南京大学化学调剂
已经有9人回复
凯伦爱佳佳
金虫 (正式写手)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 1571.1
- 散金: 97
- 红花: 1
- 帖子: 321
- 在线: 75.5小时
- 虫号: 3487227
- 注册: 2014-10-20
- 性别: GG
- 专业: 水产生物免疫学与病害控制
5楼2016-06-23 16:28:13
hc-material
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +702 - BioEPI: 1
- 应助: 517 (博士)
- 金币: 462.9
- 散金: 18028
- 红花: 313
- 帖子: 3594
- 在线: 518.8小时
- 虫号: 4027804
- 注册: 2015-08-18
- 性别: GG
- 专业: 核技术及其应用
- 管辖: 生物科学
2楼2016-06-20 11:09:24
凯伦爱佳佳
金虫 (正式写手)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 1571.1
- 散金: 97
- 红花: 1
- 帖子: 321
- 在线: 75.5小时
- 虫号: 3487227
- 注册: 2014-10-20
- 性别: GG
- 专业: 水产生物免疫学与病害控制
3楼2016-06-20 16:19:10
walking dead
金虫 (小有名气)
填料制备和蛋白纯化专家
- 应助: 40 (小学生)
- 贵宾: 0.001
- 金币: 1354.8
- 散金: 59
- 红花: 17
- 帖子: 287
- 在线: 56.5小时
- 虫号: 4175016
- 注册: 2015-10-26
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
|
既然离心后检测出蛋白了，初步推测是纯化过程中的问题。你过柱子用的缓冲液是什么，PH多少，配制有无问题，纯化过程中操作温度是否适宜。给你推荐个缓冲液体系。你试试。平衡（洗涤液）50mM Tris-Hcl（PH=8.3）的配制：0.1M Tris溶液50ml，加0.1M 盐酸20ml 0.9g Nacl，加水至100ml；（这里面加盐是为了避免离子作用吸附） 洗脱液 50mM Tris-Hcl+还原型谷胱甘肽（PH=8.3）的配制：0.1M Tris溶液50ml，0.614g还原型谷胱甘肽，然后用0.1M 盐酸调PH=8.3，加水到100ml。 注意：还原型谷胱甘肽容易氧化，需随配随用，所以缓冲液不要配的太多，根据自己情况配。 忘顺利。 |
4楼2016-06-23 15:11:44
