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凯伦爱佳佳金虫 (正式写手)
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[求助]
GST蛋白纯化已有2人参与
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我三个蛋白，检测分别在上清和包涵体。 上清直接过GST柱子，结果跑胶什么都没有。 包涵体用曲拉通、脲变性、透析复性过之后，总有白色物质析出，过GST住之后跑胶也是什么都没有。 不知道主要出错在哪一步啊？ 我的透析袋是14000的，目的蛋白50000的。 |
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hc-material
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2楼2016-06-20 11:09:24
凯伦爱佳佳
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3楼2016-06-20 16:19:10
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【答案】应助回帖
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既然离心后检测出蛋白了，初步推测是纯化过程中的问题。你过柱子用的缓冲液是什么，PH多少，配制有无问题，纯化过程中操作温度是否适宜。给你推荐个缓冲液体系。你试试。平衡（洗涤液）50mM Tris-Hcl（PH=8.3）的配制：0.1M Tris溶液50ml，加0.1M 盐酸20ml 0.9g Nacl，加水至100ml；（这里面加盐是为了避免离子作用吸附） 洗脱液 50mM Tris-Hcl+还原型谷胱甘肽（PH=8.3）的配制：0.1M Tris溶液50ml，0.614g还原型谷胱甘肽，然后用0.1M 盐酸调PH=8.3，加水到100ml。 注意：还原型谷胱甘肽容易氧化，需随配随用，所以缓冲液不要配的太多，根据自己情况配。 忘顺利。 |
4楼2016-06-23 15:11:44
凯伦爱佳佳
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5楼2016-06-23 16:28:13
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6楼2016-06-23 21:53:56