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[求助]
启动子载体构建求教
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本人已经克隆出了启动子序列，有1820bp，包含了CDS序列后面120个碱基，现在想构建启动子表达载体，想用的载体是pcambia1305.1。现在有两个问题想请教：1、启动子表达载体构建时是否要包含5`UTR？如果需要，多长为好，还是需要起始密码子前面的都需要？2、构建载体为pcambia1305.1，但是这个载体下游引物的酶切位点只有NocI和Bgl II。由于我的启动子序列里面包含有NocI，只能选择Bgl II，但是它在GUS基因的第3个密码子上，如果选用它是不是会破坏掉GUS基因的表达（后期我需要测CUS酶活）。 (}XB~JGCH@TXSR]_JJ$EOAU.png |
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4楼2018-08-30 19:36:20
Neo2000
木虫 (著名写手)
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2楼2016-10-31 22:13:30
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克隆启动子不应该是ATG前面2000bp左右吗？当然包括5｀UTR，最好报告ATG后的100到200bp.第二个问题，如果知道载体序列，可以用NEB的一步PCR法构建载体，而不需要考虑酶切位点问题。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-11-01 23:15:52