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邓霞

新虫 (初入文坛)

[求助] 启动子载体构建求教

本人已经克隆出了启动子序列,有1820bp,包含了CDS序列后面120个碱基,现在想构建启动子表达载体,想用的载体是pcambia1305.1。现在有两个问题想请教:1、启动子表达载体构建时是否要包含5`UTR?如果需要,多长为好,还是需要起始密码子前面的都需要?2、构建载体为pcambia1305.1,但是这个载体下游引物的酶切位点只有NocI和Bgl II。由于我的启动子序列里面包含有NocI,只能选择Bgl II,但是它在GUS基因的第3个密码子上,如果选用它是不是会破坏掉GUS基因的表达(后期我需要测CUS酶活)。

启动子载体构建求教
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你干嘛不用1381z呢?
研究启动子一般都是考虑ATG上游序列

发自小木虫Android客户端
2楼2016-10-31 22:13:30
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Gorstin

新虫 (初入文坛)

克隆启动子不应该是ATG前面2000bp左右吗?当然包括5`UTR,最好报告ATG后的100到200bp.第二个问题,如果知道载体序列,可以用NEB的一步PCR法构建载体,而不需要考虑酶切位点问题。

发自小木虫Android客户端
3楼2016-11-01 23:15:52
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nida0424

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以考虑用其他表达载体
4楼2018-08-30 19:36:20
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