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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 重叠延pcr总是出现很亮的杂带，求大神指教
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jiuzi59

铁杆木虫 (正式写手)
重叠一般会出现杂带的问题，像楼主这种杂带还超过目的条带的问题，可以试一下提高退火温度，如58或59，若杂带还是挺亮，只能多最pcr胶回收了。

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wbb645
11楼2016-06-15 06:13:39
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wbb645

木虫 (小有名气)
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引用回帖:
11楼: Originally posted by jiuzi59 at 2016-06-15 06:13:39
重叠一般会出现杂带的问题，像楼主这种杂带还超过目的条带的问题，可以试一下提高退火温度，如58或59，若杂带还是挺亮，只能多最pcr胶回收了。

恩，谢谢你的建议
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12楼2016-06-15 16:44:25
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wbb645

木虫 (小有名气)
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引用回帖:
9楼: Originally posted by xiedaim at 2016-06-14 09:44:42
哈喽，http://www.ebioq.com/openlab/12/0，这个网站上有关于PCR的实验资料及问答，你可以看着学习下。

恩，谢谢
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13楼2016-06-15 16:45:57
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wbb645

木虫 (小有名气)
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引用回帖:
6楼: Originally posted by 草溪河 at 2016-06-12 22:40:39
切胶吧，采用合适的琼脂糖浓度和增加胶的长度，应该可以分开的。切的时候，切薄些，宁少也勿贪多

恩，我试试看，谢谢
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14楼2016-06-15 16:58:52
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wbb645

木虫 (小有名气)
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引用回帖:
10楼: Originally posted by jiuzi59 at 2016-06-15 06:07:19
楼主范了一个致命的错误，mix第一轮会出现带A的尾巴，所以重叠PCR第一轮不能用mix，只能用扩增为平端的高保真酶。

哦，那为什么还能出现目的条带呢，求解答
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15楼2016-06-15 17:01:22
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werq63

金虫 (著名写手)
启动子pcr一般容易出现问题，你可以将片段回收再次PCr，或者重叠的时候提高退火温度

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16楼2016-06-15 22:21:25
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wy604987664

新虫 (小有名气)
我上次跟你差不多，老板对我说:你两条带离的很近？我说:差200bp左右。他说:我给你说，其实这个杂带根本没影响！！！！直接用pcr产物回收，然后我直接回收了，都没切胶，昨天测序回来比对竟然还99.8%。说这么多就是想说杂带离那么远楼主直接收吧，不放心就切胶回收，应该没问题的

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17楼2016-06-16 01:16:50
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