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wbb645木虫 (小有名气)
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[求助]
重叠延pcr总是出现很亮的杂带，求大神指教已有1人参与
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最近做重叠PCR，两个需重叠的基因分别为启动子1200bp，终止子800bp，linker为30bp，酶用的是2×Taq Master Mix，反应条件如下： 反应条件如下： 第一轮10个循环 94℃×5min 94℃×30s 50℃×30s 72℃×2min30s 72℃×10min 第二轮30个循环 94℃×5min 94℃×30s 56℃×30s 72℃×2min30s 72℃×10min 体系为50微升：Taq Master Mix 25微升、启动子1微升、终止子0.5微升、双蒸水21.5微升、上游引物1微升、下游引物1微升（由于终止子条带比启动子的亮的多，所以启动子加的多） marker分别是8000，5000,3000,2000,1000、750、500、250、100bp 实验结果：总会出现800bp左右的杂带，导致无法胶回收，求教大神指点  FAJ2}(_A~7F`_NDZT(M1KHX.png |
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我上次跟你差不多，老板对我说:你两条带离的很近？我说:差200bp左右。他说:我给你说，其实这个杂带根本没影响！！！！直接用pcr产物回收，然后我直接回收了，都没切胶，昨天测序回来比对竟然还99.8%。说这么多就是想说杂带离那么远楼主直接收吧，不放心就切胶回收，应该没问题的 发自小木虫Android客户端 |
17楼2016-06-16 01:16:50
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wbb645(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。myprayer祝您科研顺利，文章多多。 2016-06-12 17:45:23
wbb645(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。myprayer祝您科研顺利，文章多多。 2016-06-12 17:45:23
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为什么 跑开来 紫外下切胶 回收 很简单啊 发自小木虫IOS客户端 |
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wbb6452楼2016-06-12 11:41:21
3楼2016-06-12 14:23:47
wbb645
木虫 (小有名气)
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4楼2016-06-12 15:05:50