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zhangxf2014新虫 (小有名气)
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PCR扩增 已有4人参与
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请教: 最近在做PCR扩增，进行PCR产物胶回收，电泳检测结果没有条带，这是什么原因造成的？之后做连接转化(均按说明书进行)，菌液检测都是空载，请大家帮忙分析下，哪里出问题了？谢谢！ 发自小木虫Android客户端 |
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10楼2016-06-14 23:13:34
2楼2016-06-12 09:55:42
原海亮
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【答案】应助回帖
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。祝您科研顺利，文章多多。 2016-06-12 17:44:12
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首先你回收完片段检测不到，进行转化出现空载也就很正常了，另外进行pcr后，回收前，目的条带的特异性，浓度怎么样呢？你需要确定是pcr问题还是回收的问题，祝好。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-06-12 12:08:36
zhangxf2014
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4楼2016-06-12 17:04:06
pcr产物回收率用超微量测试是不准确的，胶回收一般用的是高序列盐，很难去除干净的，会影响你的检测结果，最可靠的办法是用电泳检测，按照你说的PCR产物500bp，条带单一的话也可以不用进行胶回收实验的哦，你可以直接通过pcr产物纯化试剂盒来做，简单快捷，而且用pcr产物纯化以后你可以用超微量来检测（非高序列盐），磁珠法pcr产物纯化试剂可以在15min内完成实验，不需要离心机，回收率最高可达95%左右，
5楼2016-06-13 12:59:38
504775490
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6楼2016-06-13 14:38:58
wellsunshine
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PCR有几处容易出问题，比如，引物设计，设计不好很容易产生引物二聚体，电泳结果是单一条带。还有，回收是怎么做的，我们这边一般是用试剂盒，结果一般没什么问题。 发自小木虫Android客户端 |
7楼2016-06-13 15:26:34
| 祝福 |
8楼2016-06-13 16:29:07
zhangxf2014
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9楼2016-06-13 21:22:41
