| 查看: 6692 | 回复: 14 | |||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
西大慢慢铁虫 (著名写手)
|
[求助]
怎么鉴定crispr/cas9单敲和双敲小鼠 已有1人参与
|
||
|
各位大神，我想请教一个问题，我目前通过crispr/cas9系统敲除了小鼠某个基因，通过PCR获得了该基因的片段，通过测序发现敲除的片段只有20bp,因此不能通过凝胶电泳分离目的基因鉴定小鼠属于野生，单敲，双敲（如果敲除的片段足够大，通过凝胶电泳可以发现，双敲的片段小跑的距离远，野生的片段大跑的慢，单敲的会出现两条带从而鉴别开来）。但通过测序我们可以鉴定出野生型以及单敲、双敲，而不能区分双敲和单敲，因为它们的测序结果在敲除片段的峰都是杂峰。因而，我们将PCR产物通过TA克隆然后转入大肠杆菌中培养，然后随机的挑选菌落，每个菌落培养后，再测序，并且与该基因序列对比，如果有一条序列不完整为单敲，两条不完整为双敲。然后我的问题是，通过TA克隆的载体转入大肠杆菌后，连接不同的基因型载体的大肠杆菌是分布在不同的菌落吗？或者换句话说，将不同大小的基因片段克隆在同一种质粒载体转化进入大肠杆菌，在同一个培养皿中培养，它们会分布在不同的菌落上吗？或者你们是怎样鉴定这种小鼠基因型的 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有112人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
armigera
金虫 (正式写手)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 3429.6
- 散金: 15
- 红花: 20
- 帖子: 756
- 在线: 113.5小时
- 虫号: 1975949
- 注册: 2012-09-05
- 性别: GG
- 专业: 发育生物学
3楼2016-06-12 09:03:15
西大慢慢
铁虫 (著名写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1437.7
- 散金: 3158
- 红花: 6
- 帖子: 1009
- 在线: 156.1小时
- 虫号: 3856461
- 注册: 2015-05-08
- 性别: GG
- 专业: 畜牧学
送红花一朵 4楼2016-06-12 10:36:38
armigera
金虫 (正式写手)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 3429.6
- 散金: 15
- 红花: 20
- 帖子: 756
- 在线: 113.5小时
- 虫号: 1975949
- 注册: 2012-09-05
- 性别: GG
- 专业: 发育生物学
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。祝您科研顺利，文章多多。 2016-06-12 19:38:46
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。祝您科研顺利，文章多多。 2016-06-12 19:38:46
|
每个菌落都是由一种菌生长起来的，而每个菌里面的质粒在你能看到菌落的时候都是单一的（因为有质粒不兼容性），所以你这个方法理论上是可以的。可能会遇到不同大小质粒分布数量不同，但你这是定性实验，多挑几个就能解决。 发自小木虫Android客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
2楼2016-06-12 09:00:28
西大慢慢
铁虫 (著名写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1437.7
- 散金: 3158
- 红花: 6
- 帖子: 1009
- 在线: 156.1小时
- 虫号: 3856461
- 注册: 2015-05-08
- 性别: GG
- 专业: 畜牧学
5楼2016-06-12 10:38:07
armigera
金虫 (正式写手)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 3429.6
- 散金: 15
- 红花: 20
- 帖子: 756
- 在线: 113.5小时
- 虫号: 1975949
- 注册: 2012-09-05
- 性别: GG
- 专业: 发育生物学
6楼2016-06-12 10:43:49
西大慢慢
铁虫 (著名写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1437.7
- 散金: 3158
- 红花: 6
- 帖子: 1009
- 在线: 156.1小时
- 虫号: 3856461
- 注册: 2015-05-08
- 性别: GG
- 专业: 畜牧学
7楼2016-06-12 11:10:05
8楼2016-06-13 00:55:23
西大慢慢
铁虫 (著名写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1437.7
- 散金: 3158
- 红花: 6
- 帖子: 1009
- 在线: 156.1小时
- 虫号: 3856461
- 注册: 2015-05-08
- 性别: GG
- 专业: 畜牧学
9楼2016-06-13 07:24:16
|
用酶切的方法可以吗？讲靶位点上下的一小段序列扩增出来，因为片段小，然后搜寻只在靶位点工作的酶切酶，酶切后，敲出的应该不会发生酶切的。所以如果单敲的应该有三条带，双敲的只有一条带。你觉得可以吗？ 发自小木虫Android客户端 |
10楼2016-06-15 21:23:57
