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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 3'RACE好几个条带，怎么解决？
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by yuguiyan at 2016-06-09 19:56:04
请问基因保守性你一般用NCBI的blast吗？还是有其他软件？
...

在线也行，软件也行。我以前做的基因，序列和基因组什么都没有，只能把多个其他物种的同源基因cds序列做比对，找了一个保守的cds序列（引物序列两端保守，中间序列不保守）设计了100多bp的序列，然后做RACE把全长拉出来的。
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。
31楼2016-06-11 10:27:34
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AlexchA

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
32楼2016-06-11 21:51:24
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
32楼: Originally posted by AlexchA at 2016-06-11 21:51:24
条带都切胶回收，都送测。或继续做巢氏PCR，选择降落氏PCR。

条带很弱

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33楼2016-06-11 22:09:19
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河畔佳人
顶

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34楼2016-06-12 00:20:42
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
13楼: Originally posted by angelyou at 2016-06-08 21:55:56
可以试试直接都测序，因为有些短的可能是末端降解之后的产物，亲身经验，短的序列是一样的，只是少一段。

条带都很暗，我合并了几个孔胶回收，取5微跑胶啥都看不到了

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35楼2016-06-12 09:47:02
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
13楼: Originally posted by angelyou at 2016-06-08 21:55:56
可以试试直接都测序，因为有些短的可能是末端降解之后的产物，亲身经验，短的序列是一样的，只是少一段。

送样说全都浓度过低，哭晕

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36楼2016-06-14 09:50:41
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
32楼: Originally posted by AlexchA at 2016-06-11 21:51:24
条带都切胶回收，都送测。或继续做巢氏PCR，选择降落氏PCR。

送样说全都浓度过低，无法测序

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37楼2016-06-14 09:51:07
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angelyou

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
36楼: Originally posted by yuguiyan at 2016-06-14 09:50:41
送样说全都浓度过低，哭晕
...

做克隆啊啊啊 啊啊啊 啊 啊啊 啊
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38楼2016-06-14 19:03:27
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18234099751

新虫 (正式写手)
楼主，问题解决了吗？我也遇到和你类似的

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39楼2016-12-27 00:06:44
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Ivy尘

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

设计引物的时候应该知道全长大小和引物位置，可以估计3‘产物长度的吧，取长度附近的即可。短的应该不是完整的3’端。
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40楼2016-12-27 19:38:43
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