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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 3'RACE好几个条带，怎么解决？
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cxwu10016869

金虫 (著名写手)
做第二轮PCR，根据第一轮和第二轮PCR所用引物之间的差距来判断第二轮中的哪个产物是特异的，然后切胶

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21楼2016-06-10 07:15:49
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
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21楼: Originally posted by cxwu10016869 at 2016-06-10 07:15:49
做第二轮PCR，根据第一轮和第二轮PCR所用引物之间的差距来判断第二轮中的哪个产物是特异的，然后切胶

第一轮好多条带，我咋办呀

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22楼2016-06-10 08:50:00
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
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21楼: Originally posted by cxwu10016869 at 2016-06-10 07:15:49
做第二轮PCR，根据第一轮和第二轮PCR所用引物之间的差距来判断第二轮中的哪个产物是特异的，然后切胶

第二轮用哪个当下游引物啊？是UPM还是只用short 引物啊

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23楼2016-06-10 08:55:54
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star013

新虫 (知名作家)
我们可以提供Race技术服务呃

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24楼2016-06-10 09:13:04
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
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24楼: Originally posted by star013 at 2016-06-10 09:13:04
我们可以提供Race技术服务呃

你别来捣乱了行吗

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25楼2016-06-10 10:13:14
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
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9楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2016-06-08 18:54:17
做3‘RACE保守点的方法应该把其他物种的同源基因序列做比对，找一段保守序列扩增出来测序，再根据这段序列设计3race引物。

保守区很短，断断续续的，连着的一段还不满足GC含量的要求，而且离3'末端很远

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26楼2016-06-10 11:04:41
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
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20楼: Originally posted by shizishanshang at 2016-06-10 01:07:26
你为什么不做第二轮？费很大劲吗？

正打算做第二轮，请问第一轮有好多条带我需要全部胶回收再用作模版做第二轮吗？
第二轮的下游引物也和第一轮一样吗？我第一轮用的是长短引物的混合物

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27楼2016-06-10 13:04:53
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cxwu10016869

金虫 (著名写手)
第一轮的产物稀释后直接做第二轮的模板，不需要回收

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28楼2016-06-10 13:11:12
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cxwu10016869

金虫 (著名写手)
3'端用什么引物反转录的？可以用短的引物（不含Oligo d（T））来做第二轮的下游引物。

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29楼2016-06-10 13:13:46
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
29楼: Originally posted by cxwu10016869 at 2016-06-10 13:13:46
3'端用什么引物反转录的？可以用短的引物（不含Oligo d（T））来做第二轮的下游引物。

你说的短的引物是指试剂盒里一长一短的那个短的吗？
我用的是smarter RACE试剂盒

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30楼2016-06-10 13:24:21
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