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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 3'RACE好几个条带，怎么解决？
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

[求助] 3'RACE好几个条带，怎么解决？ 已有7人参与

3'RACE好几个条带，怎么解决？需要做两轮PCR吗？还是把几个条带全部测序？
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1楼 2016-06-08 16:11:47
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
顶
2楼2016-06-08 16:19:52
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
3楼2016-06-08 16:22:15
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-09 22:01:27
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-09 22:01:34
估计你最开始的时候没有好好做到Blast，我建议你重新设定引物，然后到NCBI上进行Blast，确定好引物的特异性，再进行扩增
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奋斗是我们前进的动力！
4楼2016-06-08 16:43:32
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hihe99

银虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-09 22:02:17
可以先试着做第二轮，也可以克隆后多送几个去测序。如果碰到可变剪接或者可变加尾你还可以往那上做

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5楼2016-06-08 16:44:53
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xn8008 at 2016-06-08 16:43:32
估计你最开始的时候没有好好做到Blast，我建议你重新设定引物，然后到NCBI上进行Blast，确定好引物的特异性，再进行扩增

我这个物种基因组没公布，所以我blast显示没有跟它同源的，所以我也不知道我的引物是否特异

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6楼2016-06-08 16:53:48
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hihe99 at 2016-06-08 16:44:53
可以先试着做第二轮，也可以克隆后多送几个去测序。如果碰到可变剪接或者可变加尾你还可以往那上做

第一轮和第二轮引物需要距离多远啊？有啥特殊要求吗

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7楼2016-06-08 17:02:05
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
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8楼2016-06-08 18:15:08
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 不错的建议 2016-06-09 10:06:54
做3‘RACE保守点的方法应该把其他物种的同源基因序列做比对，找一段保守序列扩增出来测序，再根据这段序列设计3race引物。
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。
9楼2016-06-08 18:54:17
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2016-06-08 18:54:17
做3‘RACE保守点的方法应该把其他物种的同源基因序列做比对，找一段保守序列扩增出来测序，再根据这段序列设计3race引物。

基因组没公布，好多基因序列都不晓得

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10楼2016-06-08 19:27:24
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