应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助 如何设计带酶切位点的引物
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
61/1返回列表
查看: 850  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

可以吗

银虫 (小有名气)

[交流] 求助 如何设计带酶切位点的引物

我已扩增了目的基因并测序了，其中包括起始密码子和终止密码子，现在想做原核表达，先要设计带酶切位点的引物，哪位做过的虫有能帮，设计时都要注意什么？具体怎么弄？先谢谢了。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-11-04 17:14:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
DNA合成，新链的延伸方向是5→3
因此，需要在5端加上酶切位点
酶切位点可以上网查
同时，记得再加上一些保护碱基
因为内切酶除了有特异的识别位点之外，还需多几个无需特异性的碱基提供一个platform让它可以结合上去，否则会掉下来
保护碱基的具体数目可以上NEB的网站查
那么，引物的结构就是（5→3）：保护碱基+酶切位点+原来的引物序列
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2008-11-04 18:19:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

可以吗

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2008-11-4 18:19:
DNA合成，新链的延伸方向是5→3
因此，需要在5端加上酶切位点
酶切位点可以上网查
同时，记得再加上一些保护碱基
因为内切酶除了有特异的识别位点之外，还需多几个无需特异性的碱基提供一个platform让它可以结 ...

那 易产生星号活性及可能产生甲基化的酶 是怎么回事？设计的引物在后期转译时出现错位 又是怎么回事呢？
赞一下 回复此楼
3楼2008-11-04 21:30:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
注意一下质粒载体在插入了你的外援片段后编码框的变化，就是要保证你的序列出来的氨基酸序列是正确的。这就要考虑好你加入的碱基个数及切点，要确保你自己加入的起始密码起作用而不是载体上的起始密码起作用。
      甲基化酶及星活性基本不用考虑，你的载体会提供给你具体序列。你需要注意多克隆位点可以给你提供哪些可以选择的酶，而这些酶又不能出现在你的片段及载体上，剩下的就是你可以使用的酶了。看好酶切点在多克隆位点上的位置，注意好插入序列的方向，给引物加上正确的酶识别序列及保护碱基。
赞一下 回复此楼
金币是赌出来的
4楼2008-11-05 10:36:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoxingjun2008

金虫 (正式写手)
这么一说，我也好像有点明白了
赞一下 回复此楼
5楼2008-11-05 17:36:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

可以吗

银虫 (小有名气)
谢谢楼上的帮助，很有用啊。

路过的朋友还可以再补充啊

[ Last edited by 可以吗 on 2008-11-5 at 18:37 ]
赞一下 回复此楼
6楼2008-11-05 18:27:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 可以吗 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 324求调剂 +6 hanamiko 2026-03-26 8/400 2026-03-27 04:40 by wxiongid
[考研] 341求调剂 +7 青柠檬1 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:19 by wxiongid
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +6 13831862839 2026-03-24 7/350 2026-03-26 22:57 by 不吃魚的貓
[考研] 324求调剂 +3 hanamiko 2026-03-26 3/150 2026-03-26 21:00 by sanrepian
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +7 NIFFFfff 2026-03-20 7/350 2026-03-26 20:45 by 不吃魚的貓
[考研] 321求调剂 +5 材料cailiao 2026-03-21 5/250 2026-03-26 20:41 by fmesaito
[考研] 生物学 296 求调剂 +4 朵朵- 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:01 by 不吃魚的貓
[考研] 297求调剂 +6 田洪有 2026-03-26 6/300 2026-03-26 15:55 by 不吃魚的貓
[考研] 315分求调剂 +5 26考研上岸版26 2026-03-26 5/250 2026-03-26 12:11 by laoshidan
[考研] 环境专硕324分求调剂推荐 +5 轩小宁—— 2026-03-26 5/250 2026-03-26 12:05 by i_cooler
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 材料调剂 +3 iwinso 2026-03-23 3/150 2026-03-25 11:29 by greychen00
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生（材料、化学、电化学，环境） +4 我爱学电池 2026-03-23 4/200 2026-03-25 00:59 by 1027_324
[考研] 0703化学调剂，求导师收 +7 天天好运来上岸� 2026-03-24 7/350 2026-03-24 20:26 by peike
[考研] 调剂 +4 13853210211 2026-03-24 4/200 2026-03-24 19:44 by ms629
[有机交流] 有机合成求助 20+3 FENGSHUJEI 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:31 by 88817753
[考研] 300求调剂，材料科学英一数二 +5 leaflight 2026-03-24 5/250 2026-03-24 16:25 by laoshidan
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗？ +3 lishucheng1 2026-03-22 5/250 2026-03-24 08:22 by gltch
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[考研] 考研调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭