应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助 如何设计带酶切位点的引物
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 857  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

可以吗

银虫 (小有名气)

[交流] 求助 如何设计带酶切位点的引物

我已扩增了目的基因并测序了，其中包括起始密码子和终止密码子，现在想做原核表达，先要设计带酶切位点的引物，哪位做过的虫有能帮，设计时都要注意什么？具体怎么弄？先谢谢了。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-11-04 17:14:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

可以吗

银虫 (小有名气)
谢谢楼上的帮助，很有用啊。

路过的朋友还可以再补充啊

[ Last edited by 可以吗 on 2008-11-5 at 18:37 ]
赞一下 回复此楼
6楼2008-11-05 18:27:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
DNA合成，新链的延伸方向是5→3
因此，需要在5端加上酶切位点
酶切位点可以上网查
同时，记得再加上一些保护碱基
因为内切酶除了有特异的识别位点之外，还需多几个无需特异性的碱基提供一个platform让它可以结合上去，否则会掉下来
保护碱基的具体数目可以上NEB的网站查
那么，引物的结构就是（5→3）：保护碱基+酶切位点+原来的引物序列
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2008-11-04 18:19:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

可以吗

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2008-11-4 18:19:
DNA合成，新链的延伸方向是5→3
因此，需要在5端加上酶切位点
酶切位点可以上网查
同时，记得再加上一些保护碱基
因为内切酶除了有特异的识别位点之外，还需多几个无需特异性的碱基提供一个platform让它可以结 ...

那 易产生星号活性及可能产生甲基化的酶 是怎么回事？设计的引物在后期转译时出现错位 又是怎么回事呢？
赞一下 回复此楼
3楼2008-11-04 21:30:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
注意一下质粒载体在插入了你的外援片段后编码框的变化，就是要保证你的序列出来的氨基酸序列是正确的。这就要考虑好你加入的碱基个数及切点，要确保你自己加入的起始密码起作用而不是载体上的起始密码起作用。
      甲基化酶及星活性基本不用考虑，你的载体会提供给你具体序列。你需要注意多克隆位点可以给你提供哪些可以选择的酶，而这些酶又不能出现在你的片段及载体上，剩下的就是你可以使用的酶了。看好酶切点在多克隆位点上的位置，注意好插入序列的方向，给引物加上正确的酶识别序列及保护碱基。
赞一下 回复此楼
金币是赌出来的
4楼2008-11-05 10:36:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600，材料与化工321分调剂 +3 大馋小子 2026-03-27 4/200 2026-03-27 10:43 by guoweigw
[考研] 一志愿211，335分，0856，求调剂院校和导师 +3 倾____萧 2026-03-27 4/200 2026-03-27 10:15 by 不吃魚的貓
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +9 77chaselx 2026-03-20 9/450 2026-03-27 09:00 by 3Strings
[考研] 266求调剂 +4 阳阳哇塞 2026-03-27 4/200 2026-03-27 07:35 by wxiongid
[考研] 329求调剂 +7 钮恩雪 2026-03-25 7/350 2026-03-27 04:28 by wxiongid
[考研] 考研调剂 +9 呼呼？~+123456 2026-03-24 9/450 2026-03-27 03:47 by wxiongid
[考研] 复试调剂，一志愿南农083200食品科学与工程 +4 XQTJZ 2026-03-26 4/200 2026-03-27 01:23 by dgnhs
[考研] 食品工程专硕求调剂 +3 小张zxy张 2026-03-26 3/150 2026-03-27 01:14 by dgnhs
[考研] 341求调剂 +7 青柠檬1 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:19 by wxiongid
[考研] 321求调剂 +6 Ymlll 2026-03-24 6/300 2026-03-26 20:50 by 不吃魚的貓
[考研] 325求调剂 +3 Aoyijiang 2026-03-23 3/150 2026-03-26 20:46 by 不吃魚的貓
[考研] 279求调剂 +6 红衣隐官 2026-03-21 6/300 2026-03-26 18:32 by 不吃魚的貓
[考研] 085602 289分求调剂 +8 WWW西西弗斯 2026-03-24 8/400 2026-03-26 16:33 by 不吃魚的貓
[考研] 281求调剂 +6 Koxui 2026-03-24 7/350 2026-03-26 15:37 by 无际的草原
[考研] 总分293求调剂 +6 加一一九 2026-03-25 8/400 2026-03-26 13:30 by yujianx
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:03 by Ainin_
[考研] 求调剂 +6 研研，接电话 2026-03-24 7/350 2026-03-24 17:01 by barlinike
[考研] 材料考研调剂生 +3 黄粱一梦千年 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:00 by barlinike
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭