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一个400左右的片段PCR想了各种办法就是P不出来，可是别人的文献里面说能做出来，大神们有什么好的方法吗？

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1楼 2016-06-05 13:25:02

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阿粥333

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引物什么的没有问题吗？

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2楼2016-06-05 14:22:51

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DY.W

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2楼: Originally posted by 阿粥333 at 2016-06-05 14:22:51
引物什么的没有问题吗？

引物没问题

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3楼2016-06-05 15:26:45

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DNA爱Dnase

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1、引物模板2、药品PCR仪有没有问题

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4楼2016-06-05 15:56:38

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4楼: Originally posted by DNA爱Dnase at 2016-06-05 15:56:38
1、引物模板2、药品PCR仪有没有问题

肯定是没有问题，一起做的其他基因都没问题

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5楼2016-06-05 16:20:21

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miega

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-06 19:47:12

1.与tm值有关，做几个温度梯度试试 2.引物有问题，重新设计

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6楼2016-06-05 19:11:40

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6楼: Originally posted by miega at 2016-06-05 19:11:40
1.与tm值有关，做几个温度梯度试试 2.引物有问题，重新设计

都试过了，就是不行。。。。

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7楼2016-06-05 20:07:32

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221345

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-06 19:47:37

可以用梯度PCR仪试一下，引物带有酶切位点吗

8楼2016-06-05 20:46:37

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8楼: Originally posted by 221345 at 2016-06-05 20:46:37
可以用梯度PCR仪试一下，引物带有酶切位点吗

没有酶切位点

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9楼2016-06-05 20:57:14

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-06 19:47:53

引用回帖:

9楼: Originally posted by DY.W at 2016-06-05 20:57:14
没有酶切位点
...

能否保证模版的质量和浓度，如果梯度没有效果，建议重新合成引物，

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10楼2016-06-05 21:04:40

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