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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 基因扩增求助
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黄启秀

新虫 (正式写手)
哪里的文献 ～  文献中的引物也有可能做不出来～  如果排除各种模板呀，退货温度啊，  酶的问题  就只有考虑引物了～

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11楼2016-06-05 22:15:26
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fengjunchen

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果基因来源是原核生物，那么PCR模板会是DNA，那么没有道理P不出来的。
如果基因来源是真核生物，那么PCR模板大概会是cDNA，那么在其他操作都没问题的情况下，P不出来可能是这个基因在RNA中本身丰度过低，这和培养条件和状态可能相关；或者RNA抽提质量不够好，那么表达丰度越低的基因越难P。
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12楼2016-06-06 12:47:12
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1135482512

铁杆木虫 (著名写手)
八成是引物问题

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13楼2016-06-06 20:27:23
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ssswzf

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
感谢参与，应助指数 +1
楼主要知道，文献只是参考；
1 首先你确定你做的所有东西和文献里面的用的是一样的吗？如果不是，有差异是很正常的
2 pcr模板本身的GC含量怎么样？用的什么taq？有没有使用过增强剂等等来提高特异性？
国外的文献都不能完全参考的，实际情况具体分析，祝好运！
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14楼2016-06-07 09:59:41
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换个更好的酶
或者使用荧光定量的超混液
小心文献有作假的
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有你真好
15楼2016-06-07 13:37:51
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wywei2012

新虫 (初入文坛)
重新设计引物比较靠谱，文献的看看就行了，别太认真

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16楼2016-06-07 13:59:03
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DY.W

新虫 (小有名气)
谢谢大家，今天用了一个过表达植株的cdn扩出来了

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17楼2016-06-07 16:32:09
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啦啦啦chen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
很有可能是设计的引物有问题
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18楼2016-06-07 17:20:22
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lzhxhky

铁虫 (小有名气)
能给出基因名称和目标序列以及引物序列吗？

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我是大帅哥
19楼2016-06-07 19:44:14
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dcb005

金虫 (著名写手)
估计是模板问题，真不行就合成

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★穷则独善其身,达则兼济天下★
20楼2016-06-07 22:33:15
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