24小时热门版块排行榜    

查看: 1298  |  回复: 15

yuan720222

新虫 (初入文坛)

[求助] 表达载体 已有2人参与

目的片段插入到双元表达载体中,经过转化后,在抗氯霉素的培养基中不能长斑,已经做了很长时间了,不知道大神们有没有遇到过这种现象,我的目的片段为5000bp,载体片段为11000bp,是不是因为片段过大,不容易连接成功?我用的T4酶进行连接的。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用于克隆的空载体对氯霉素的抗性如何?还是说目的片段才带有氯霉素抗性?
为什么
3楼2016-06-04 17:56:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

gin_starwind

新虫 (初入文坛)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-04 22:03:51
片段确实大了点,不好连。有必要的话换个感受态菌种试试,或考虑利用同源重组。

发自小木虫Android客户端
2楼2016-06-04 17:38:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

15113546664

新虫 (初入文坛)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-06 19:48:18
请问内切酶切的时候位点有没有搞错,或者只用一种酶切,环化的可能性很高,空载体,也可能是目的基因的确太大了,换个载体,看看是表达载体还是克隆载体,

发自小木虫Android客户端
4楼2016-06-05 00:11:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuan720222

新虫 (初入文坛)

内容已删除
5楼2016-06-05 08:02:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuan720222

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 547star at 2016-06-04 17:56:54
用于克隆的空载体对氯霉素的抗性如何?还是说目的片段才带有氯霉素抗性?

我的载体抗氯霉素
6楼2016-06-05 08:03:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuan720222

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gin_starwind at 2016-06-04 17:38:44
片段确实大了点,不好连。有必要的话换个感受态菌种试试,或考虑利用同源重组。

我们用的是DH5@
7楼2016-06-05 08:06:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maixiaodaou

新虫 (小有名气)

片段有点长,是过夜连的吗?还有就是感受态的问题

发自小木虫Android客户端
8楼2016-06-05 09:33:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gin_starwind

新虫 (初入文坛)

先连接过夜试试,不行的话,感受态菌有条件试试DH10B。

发自小木虫Android客户端
9楼2016-06-05 11:56:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

221345

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-06 19:48:48
可以先连接克隆载体,再连入表达载体,这样比直连表达会容易一些,我做过8K的,阳性菌斑特少,可是就是想要的,试试吧
10楼2016-06-05 21:06:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yuan720222 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售T0P一区SCI文章,我:8O5.51.O.54,科目齐全,可+急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 19:18 by q1p9ixelzp
[教师之家] 售T0P一区SCI文章,我:8O5.51.O.54,科目齐全,可+急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 18:58 by q1p9ixelzp
[公派出国] 售T0P一区SCI文章,我:8O5.51.O.54,科目齐全,可+急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 18:00 by q1p9ixelzp
[考研] 售T0P一区SCI文章,我:8O5.51.O.54,科目齐全,可+急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 4/200 2026-06-21 17:45 by q1p9ixelzp
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章,我:8O5.51.O.54,科目齐全,可+急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 17:40 by q1p9ixelzp
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章,我:8O5.51.O.54,科目齐全,可+急 +3 9skg9htng1 2026-06-20 3/150 2026-06-21 17:37 by q1p9ixelzp
[考博] 售T0P一区SCI文章,我:8O5.51.O.54,科目齐全,可+急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 5/250 2026-06-21 17:20 by ky8v3skvft
[博后之家] 售T0P一区SCI文章,我:8O5.51.O.54,科目齐全,可+急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 6/300 2026-06-21 17:05 by ky8v3skvft
[公派出国] 售T0P一区SCI文章,我:8O5.51.O.54,科目齐全,可+急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 5/250 2026-06-21 17:00 by ky8v3skvft
[教师之家] 售T0P一区SCI文章,我:8O5.51.O.54,科目齐全,可+急 +5 vlfdw50o0u 2026-06-20 7/350 2026-06-21 16:57 by ky8v3skvft
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章,我:8O5.51.O.54,科目齐全,可+急 +3 vlfdw50o0u 2026-06-20 5/250 2026-06-21 16:45 by ky8v3skvft
[教师之家] 售T0P一区SCI文章,我:8O5.51.O.54,科目齐全,可+急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 7/350 2026-06-21 16:40 by ky8v3skvft
[论文投稿] 售T0P一区SCI文章,我:8O5.51.O.54,科目齐全,可+急 +4 vlfdw50o0u 2026-06-20 9/450 2026-06-21 16:37 by ky8v3skvft
[基金申请] E0414, 我的本子有没有希望? +7 布布和一二 2026-06-17 8/400 2026-06-21 15:44 by lwliwei1989
[基金申请] 青A35岁以下通知答辩了吗 +3 暨阳一只柴 2026-06-17 3/150 2026-06-21 09:39 by kudofaye
[考博] 【全奖博士/科研助理/博后招生】新加坡南洋理工大学机械与航空航天学院 +3 robohaha 2026-06-15 4/200 2026-06-21 00:36 by lanbing1
[硕博家园] 一篇论文同时出现在两个期刊,一模一样,这算不算学术不端,请各位老师斧正。 +11 mahl005 2026-06-14 12/600 2026-06-18 17:01 by 770904134
[基金申请] 希望面上有个好结果 +7 碧水00 2026-06-16 7/350 2026-06-18 12:18 by wuke100666
[论文投稿] 三区计算机方向期刊推荐 +5 1457340941 2026-06-15 5/250 2026-06-17 13:16 by 会议编辑
[论文投稿] sci论文二审求助 +5 潘倍倍 2026-06-15 5/250 2026-06-16 10:15 by xs74101122
信息提示
请填处理意见