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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于重组DNA转化宿主细胞（大肠杆菌DH5α）后阳性克隆的筛选
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小李纸11

银虫 (正式写手)

[求助] 关于重组DNA转化宿主细胞（大肠杆菌DH5α）后阳性克隆的筛选 已有4人参与

求助，将目的片段和载体（酶切并纯化后的）进行连接反应，然后转化大肠杆菌感受态细胞，如果连接不成功，那单独的目的片段或单独的载体片段能导入到感受态细胞中吗？如果能导入的话，导入后的宿主菌能正常生长吗？
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1楼 2016-06-01 21:44:26
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yesucao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。myprayer祝您科研顺利，文章多多。 2016-06-02 21:56:15
小李纸11: 金币+6, ★★★很有帮助 2016-07-04 14:14:35
无论是化转还是电转，单独的目的片段或单独的载体片段都能导入到感受态细胞中，需要查看你用的是单酶切还是双酶切了。若双酶切，单独的片段无法复制，所以在宿主菌中无法生长；若是单酶切，且未去磷酸化，载体会出现自连，在宿主菌中出现空载的情况。
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2楼2016-06-01 22:39:57
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易水秋寒

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。myprayer祝您科研顺利，文章多多。 2016-06-02 21:56:28
可使用蓝白菌筛选，蓝菌即为空载体自连
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3楼2016-06-02 08:54:56
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super_mm

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。myprayer祝您科研顺利，文章多多。 2016-06-02 21:56:37
小李纸11: 金币+2, ★★★很有帮助 2016-07-04 14:14:47
都能导入，只有连接成功的和空载体自连的能长，所以需要蓝白斑筛选，不行的话就提质粒筛选
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4楼2016-06-02 15:12:15
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vjebejw570
祝福
5楼2016-06-02 16:04:04
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brown-eyes

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小李纸11: 金币+2, ★★★很有帮助 2016-07-04 14:14:59
都能导入，但是因为片段没有抗性，无法在抗性板上生长，只有自连的空载体能够生长成克隆。
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6楼2016-06-03 16:06:07
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s4f5h7

新虫 (小有名气)
加油加油！
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7楼2016-06-03 16:39:54
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