应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 如何做磷酸化氨基酸位点的突变？求大神指点！
51/1返回列表
查看: 3630  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xczmed

木虫 (初入文坛)

[求助] 如何做磷酸化氨基酸位点的突变？求大神指点！ 已有1人参与

想研究肿瘤细胞中某个兴趣蛋白A干扰后（功能已经验证）是否影响下游蛋白B的磷酸化，有文献报道B 的T423磷酸化可以引起我们验证的功能改变，我想把肿瘤细胞中B蛋白423的T进行突变后看功能表型是否回复，这个怎么做？很困难吗（从没做过这方面实验，需要多长时间能掌握）？请虫友不吝指教！
另：A干扰后B蛋白WB出现了double bands（其中一条保持原位，另一条稍向上移动），我猜想这与磷酸化有关，不知道这个想法是主要因素吗？还应该考虑什么问题？

如何做磷酸化氨基酸位点的突变？求大神指点！
Snap1.jpg@wizardfan@youlinglyw@biostar2009
回复此楼

» 猜你喜欢
Behigher,belarger,beupper.
1楼 2016-06-01 02:31:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

花满楼wjy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
xczmed: 金币+20, ★★★很有帮助 2016-06-08 02:26:51
引用回帖:
7楼: Originally posted by xczmed at 2016-06-04 02:33:53
太感谢了，有没有推荐的教程我能学下如何上手，虽然老板说方法不是问题，但时间有限，还有半年多试验时间，作为新人一头雾水中
...

就是做个PCR，然后用DPNI处理4h，然后转化便可，这个实验DNA聚合酶是关键，现在我们用的是国产诺维赞的酶，很好用。

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2016-06-04 08:13:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

花满楼wjy

新虫 (初入文坛)
可以吧T突变成D

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
2楼2016-06-01 06:21:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

花满楼wjy

新虫 (初入文坛)
WB验证磷酸化需要cip处理作为对照，此外，你的图不太好看，要多做做啊

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

xczmed
3楼2016-06-01 06:22:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xczmed

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 花满楼wjy at 2016-06-01 06:21:24
可以吧T突变成D

您好！我写错了，是Y（tyrosine），我看文献上面是将Y 突变成F，用stratagene试剂盒， 因为从来没有做过突变，目前实验室也没有人做类似工作，不知道新人上手需要多久（这个蛋白分子量要130KD左右，我听说大分子更加难做，第一步合成有效表达的质粒就不容易）
赞一下 回复此楼
Behigher,belarger,beupper.
4楼2016-06-02 21:25:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 科研孤儿太难了 +14 我4大白菜 2026-08-20 15/750 2026-08-20 22:33 by 袁向阳007
[基金申请] 言之凿凿，明天官网会通知放榜？ +15 医学老男孩 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:35 by CaoLG
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 22/1100 2026-08-20 17:03 by yaoyewhu2008
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+3 snowwithsea 2026-08-19 12/600 2026-08-20 15:56 by lfy8008
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭