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xczmed

木虫 (初入文坛)

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[求助] 如何做磷酸化氨基酸位点的突变？求大神指点！已有1人参与

想研究肿瘤细胞中某个兴趣蛋白A干扰后（功能已经验证）是否影响下游蛋白B的磷酸化，有文献报道B 的T423磷酸化可以引起我们验证的功能改变，我想把肿瘤细胞中B蛋白423的T进行突变后看功能表型是否回复，这个怎么做？很困难吗（从没做过这方面实验，需要多长时间能掌握）？请虫友不吝指教！
另：A干扰后B蛋白WB出现了double bands（其中一条保持原位，另一条稍向上移动），我猜想这与磷酸化有关，不知道这个想法是主要因素吗？还应该考虑什么问题？

Snap1.jpg@wizardfan@youlinglyw@biostar2009

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Behigher,belarger,beupper.

1楼 2016-06-01 02:31:13

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

花满楼wjy

新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

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引用回帖:

4楼: Originally posted by xczmed at 2016-06-02 21:25:37
您好！我写错了，是Y（tyrosine），我看文献上面是将Y 突变成F，用stratagene试剂盒，因为从来没有做过突变，目前实验室也没有人做类似工作，不知道新人上手需要多久（这个蛋白分子量要130KD左右，我听说大分子更 ...

点突变很好做，不用担心，2天即可，不好看是指条带不是典型的条带，不好看

发自小木虫IOS客户端