应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 如何做磷酸化氨基酸位点的突变？求大神指点！
汕头大学海洋科学接受调剂
51/1返回列表
查看: 3452  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xczmed

木虫 (初入文坛)

[求助] 如何做磷酸化氨基酸位点的突变？求大神指点！ 已有1人参与

想研究肿瘤细胞中某个兴趣蛋白A干扰后（功能已经验证）是否影响下游蛋白B的磷酸化，有文献报道B 的T423磷酸化可以引起我们验证的功能改变，我想把肿瘤细胞中B蛋白423的T进行突变后看功能表型是否回复，这个怎么做？很困难吗（从没做过这方面实验，需要多长时间能掌握）？请虫友不吝指教！
另：A干扰后B蛋白WB出现了double bands（其中一条保持原位，另一条稍向上移动），我猜想这与磷酸化有关，不知道这个想法是主要因素吗？还应该考虑什么问题？

如何做磷酸化氨基酸位点的突变？求大神指点！
Snap1.jpg@wizardfan@youlinglyw@biostar2009
回复此楼

» 猜你喜欢
Behigher,belarger,beupper.
1楼 2016-06-01 02:31:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

花满楼wjy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by xczmed at 2016-06-02 21:25:37
您好！我写错了，是Y（tyrosine），我看文献上面是将Y 突变成F，用stratagene试剂盒， 因为从来没有做过突变，目前实验室也没有人做类似工作，不知道新人上手需要多久（这个蛋白分子量要130KD左右，我听说大分子更 ...

点突变很好做，不用担心，2天即可，不好看是指条带不是典型的条带，不好看

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
6楼2016-06-03 08:09:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

花满楼wjy

新虫 (初入文坛)
可以吧T突变成D

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
2楼2016-06-01 06:21:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

花满楼wjy

新虫 (初入文坛)
WB验证磷酸化需要cip处理作为对照，此外，你的图不太好看，要多做做啊

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

xczmed
3楼2016-06-01 06:22:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xczmed

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 花满楼wjy at 2016-06-01 06:21:24
可以吧T突变成D

您好！我写错了，是Y（tyrosine），我看文献上面是将Y 突变成F，用stratagene试剂盒， 因为从来没有做过突变，目前实验室也没有人做类似工作，不知道新人上手需要多久（这个蛋白分子量要130KD左右，我听说大分子更加难做，第一步合成有效表达的质粒就不容易）
赞一下 回复此楼
Behigher,belarger,beupper.
4楼2016-06-02 21:25:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 245求调剂 +3 冰糖橘?汽水 2026-04-13 7/350 2026-04-13 16:42 by 冰糖橘?汽水
[教师之家] 转长聘了 +3 简单化xn 2026-04-13 3/150 2026-04-13 14:18 by wwwkkk83
[考研] 366求调剂 +9 不知名的小卅 2026-04-11 9/450 2026-04-13 01:19 by 幸免 ..
[考研] 0854调剂 +12 长弓傲 2026-04-09 13/650 2026-04-12 09:56 by 逆水乘风
[考研] 316求调剂 +5 想读研究生( ?∵ 2026-04-07 5/250 2026-04-12 00:43 by 蓝云思雨
[考研] 280求调剂 +13 wzzz王 2026-04-09 13/650 2026-04-12 00:31 by 勇攀高峰0126
[考研] 调剂 +10 只叙离别辞 2026-04-09 12/600 2026-04-11 20:57 by 逆水乘风
[考研] 求调剂，一志愿大连理工大学354分 +5 雨声余生 2026-04-11 6/300 2026-04-11 16:12 by 雨声余生
[考研] 085501机械专硕 302分 不挑专业求调剂 +7 汪某. 2026-04-09 7/350 2026-04-11 14:37 by luhong1990
[考研] 085506-求调剂-285分 +3 雷欧飞踢 2026-04-08 3/150 2026-04-11 08:37 by zhq0425
[考研] 考研调剂 +26 硕星赴 2026-04-09 27/1350 2026-04-10 22:24 by 猪会飞
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +3 加大号饭盒袋 2026-04-10 3/150 2026-04-10 22:23 by 286640313
[考研] 初试261 +3 Asht少 2026-04-10 6/300 2026-04-10 16:38 by Asht少
[考研] 367求调剂 +10 hffQAQ 2026-04-09 10/500 2026-04-09 18:06 by lijunpoly
[考研] 083200 初试305分 求调剂 暂不考虑跨专业 +15 Claireyyyy 2026-04-09 15/750 2026-04-09 16:11 by zhuimr
[考研] 085400电子信息类（川大控制工程）求调剂可跨专业 求老师联系 +3 626776879 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:05 by 猪会飞
[考研] 一志愿武理车辆 281 求调剂 +5 上岸研究生. 2026-04-07 5/250 2026-04-09 15:56 by only周
[考研] 一志愿西南大学生物学学硕344 求生物学相关调剂/生物与医药 +7 超人不会飞@ 2026-04-08 7/350 2026-04-09 09:35 by gong120082
[考研] 328求调剂 +17 lftmya 2026-04-07 18/900 2026-04-09 08:05 by 5268321
[考研] 316求调剂 +4 15318418673 2026-04-07 4/200 2026-04-07 22:12 by hemengdong
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭