24小时热门版块排行榜    

查看: 1042  |  回复: 13
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wangxuan

木虫 (著名写手)

[交流] 有谁做过反向PCR的,请教一个问题

请问染色酶切完以后的电泳条带是什么样的,
还有连接前要不要拿酚/氯仿抽提?我做了很久都没有扩增出来。
谢谢谢谢!!!!

[ Last edited by amisking on 2009-5-31 at 10:21 ]
回复此楼
在其位,谋其政,成其事
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangxuan

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by annwt at 11/5/08  17:14:
从你的描述看,酶切彻底。
至于扩增基因,为什么用反向PCR,是扩启动子吗?
反向PCR的关键是模板DNA的连接问题,无法检测DNA是否连接,只能是看PCR的结果。而又不知道目的片段的长度,好像是行走在黑夜里,^_^。 ...

谢谢 我要扩增一个未知基因,现在只是根据保守区扩增出中间的一段。
在其位,谋其政,成其事
11楼2008-11-05 18:04:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

wangxuan

木虫 (著名写手)

另外 请教一下大家都是如何扩增未知基因的
在其位,谋其政,成其事
2楼2008-11-02 19:33:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

speculiar

银虫 (小有名气)


amisking(金币+1,VIP+0): 10-8 15:50
我认为反向PCR是最简单的扩增侧翼基因序列的方法了。
酶切后是需要酚氯仿抽提的,但是我一般用PCR纯化试剂盒纯化。
3楼2008-11-02 23:00:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangxuan

木虫 (著名写手)

谢谢  但是有一点:  
   我的酶切结果跑电泳没有形成条带 ,在紫外下出现一大片连续的荧光,请问这个结果你们有没有遇到过?
在其位,谋其政,成其事
4楼2008-11-03 08:53:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +24 医学老男孩 2026-08-13 50/2500 2026-08-15 06:38 by 学员8dgXkO
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:45 by 4wMiSEwB6436
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 4/200 2026-08-15 04:17 by 4wMiSEwB6436
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 02:21 by 4wMiSEwB6436
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:28 by 4wMiSEwB6436
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 7/350 2026-08-15 00:40 by 4wMiSEwB6436
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
信息提示
请填处理意见