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wangxuan

木虫 (著名写手)

[交流] 有谁做过反向PCR的,请教一个问题

请问染色酶切完以后的电泳条带是什么样的,
还有连接前要不要拿酚/氯仿抽提?我做了很久都没有扩增出来。
谢谢谢谢!!!!

[ Last edited by amisking on 2009-5-31 at 10:21 ]
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在其位,谋其政,成其事
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wangxuan

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by annwt at 11/5/08  17:14:
从你的描述看,酶切彻底。
至于扩增基因,为什么用反向PCR,是扩启动子吗?
反向PCR的关键是模板DNA的连接问题,无法检测DNA是否连接,只能是看PCR的结果。而又不知道目的片段的长度,好像是行走在黑夜里,^_^。 ...

谢谢 我要扩增一个未知基因,现在只是根据保守区扩增出中间的一段。
在其位,谋其政,成其事
11楼2008-11-05 18:04:27
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查看全部 14 个回答

wangxuan

木虫 (著名写手)

另外 请教一下大家都是如何扩增未知基因的
在其位,谋其政,成其事
2楼2008-11-02 19:33:52
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speculiar

银虫 (小有名气)


amisking(金币+1,VIP+0): 10-8 15:50
我认为反向PCR是最简单的扩增侧翼基因序列的方法了。
酶切后是需要酚氯仿抽提的,但是我一般用PCR纯化试剂盒纯化。
3楼2008-11-02 23:00:23
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wangxuan

木虫 (著名写手)

谢谢  但是有一点:  
   我的酶切结果跑电泳没有形成条带 ,在紫外下出现一大片连续的荧光,请问这个结果你们有没有遇到过?
在其位,谋其政,成其事
4楼2008-11-03 08:53:29
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