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镍柱纯化遇到点问题,请教大家 已有4人参与
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同一批样品分两次纯化,问题如下: 第一次上样后,用不含咪唑的洗液洗了两次每次5毫升,然后梯度洗脱,发现5毫升50mM咪唑洗下来的目的蛋白多但杂带也多 第二次纯化用不含咪唑的洗液多洗了一会,同时20mM咪唑的用量也加大了,结果50mM洗脱的杂带明显变少了但目的蛋白也少了,同时20mM下目的蛋白的量相对多了,基本和50mM洗脱的差不多了 大家结合自己的经验给点意见吧,谢谢了 发自小木虫Android客户端 |
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lishuaiguang
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7楼2016-05-31 00:53:47
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2楼2016-05-27 15:20:04
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洗脱液是20 50 100 250 500mM梯度的咪唑,然后50mM磷酸二氢钠和300mM氯化钠,pH8.0,这个图片是我今天摸索的纯化,就是上样后清洗充分,然后用5mL的20mM咪唑洗一遍,第四泳道50mM洗脱的,目的蛋白最多,基本上蛋白都下来了,后面就没什么蛋白了,这样的杂带能接受吗?还是继续要摸索或者换一下更好的纯化柱?我用的是IDA柱,据说NTA效果更好? 感谢指导 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-05-27 16:52:53
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