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镍柱纯化遇到点问题，请教大家 已有4人参与
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同一批样品分两次纯化，问题如下: 第一次上样后，用不含咪唑的洗液洗了两次每次5毫升，然后梯度洗脱，发现5毫升50mM咪唑洗下来的目的蛋白多但杂带也多 第二次纯化用不含咪唑的洗液多洗了一会，同时20mM咪唑的用量也加大了，结果50mM洗脱的杂带明显变少了但目的蛋白也少了，同时20mM下目的蛋白的量相对多了，基本和50mM洗脱的差不多了 大家结合自己的经验给点意见吧，谢谢了 发自小木虫Android客户端 |
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2楼2016-05-27 15:20:04
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洗脱液是20 50 100 250 500mM梯度的咪唑，然后50mM磷酸二氢钠和300mM氯化钠，pH8.0，这个图片是我今天摸索的纯化，就是上样后清洗充分，然后用5mL的20mM咪唑洗一遍，第四泳道50mM洗脱的，目的蛋白最多，基本上蛋白都下来了，后面就没什么蛋白了，这样的杂带能接受吗？还是继续要摸索或者换一下更好的纯化柱？我用的是IDA柱，据说NTA效果更好？ 感谢指导  发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-05-27 16:52:53
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