| 查看: 2315 | 回复: 8 | |||
[交流]
镍柱纯化遇到点问题，请教大家 已有4人参与
|
|
同一批样品分两次纯化，问题如下: 第一次上样后，用不含咪唑的洗液洗了两次每次5毫升，然后梯度洗脱，发现5毫升50mM咪唑洗下来的目的蛋白多但杂带也多 第二次纯化用不含咪唑的洗液多洗了一会，同时20mM咪唑的用量也加大了，结果50mM洗脱的杂带明显变少了但目的蛋白也少了，同时20mM下目的蛋白的量相对多了，基本和50mM洗脱的差不多了 大家结合自己的经验给点意见吧，谢谢了 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
化学专业申博
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
评审有感
已经有27人回复
-
论文撤稿了
已经有7人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
河北省自然科学基金
已经有9人回复
hc-material
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +702 - BioEPI: 1
- 应助: 517 (博士)
- 金币: 462.9
- 散金: 18028
- 红花: 313
- 帖子: 3594
- 在线: 518.8小时
- 虫号: 4027804
- 注册: 2015-08-18
- 性别: GG
- 专业: 核技术及其应用
- 管辖: 生物科学
2楼2016-05-27 15:20:04
|
洗脱液是20 50 100 250 500mM梯度的咪唑，然后50mM磷酸二氢钠和300mM氯化钠，pH8.0，这个图片是我今天摸索的纯化，就是上样后清洗充分，然后用5mL的20mM咪唑洗一遍，第四泳道50mM洗脱的，目的蛋白最多，基本上蛋白都下来了，后面就没什么蛋白了，这样的杂带能接受吗？还是继续要摸索或者换一下更好的纯化柱？我用的是IDA柱，据说NTA效果更好？ 感谢指导  发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-05-27 16:52:53
hc-material
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +702 - BioEPI: 1
- 应助: 517 (博士)
- 金币: 462.9
- 散金: 18028
- 红花: 313
- 帖子: 3594
- 在线: 518.8小时
- 虫号: 4027804
- 注册: 2015-08-18
- 性别: GG
- 专业: 核技术及其应用
- 管辖: 生物科学
4楼2016-05-27 16:58:06
5楼2016-05-27 17:09:46
6楼2016-05-30 02:17:11
lishuaiguang
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3.8
- 散金: 10
- 红花: 1
- 帖子: 49
- 在线: 6.8小时
- 虫号: 4132308
- 注册: 2015-10-10
- 专业: 生物大分子结构与功能
7楼2016-05-31 00:53:47
hc-material
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +702 - BioEPI: 1
- 应助: 517 (博士)
- 金币: 462.9
- 散金: 18028
- 红花: 313
- 帖子: 3594
- 在线: 518.8小时
- 虫号: 4027804
- 注册: 2015-08-18
- 性别: GG
- 专业: 核技术及其应用
- 管辖: 生物科学
8楼2016-05-31 10:06:33
9楼2016-10-02 11:21:32
10