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陈虫虫

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于两种不同物质的生物样品处理方法的优化已有3人参与

最近在做一个很纠结的实验,要从生物样品中提取三种物质出来,其中两种是弱碱性物质,脂溶性很好,一种是对碱性及敏感物质,水溶性很好,现在采取蛋白沉淀法,用甲醇、乙腈、乙醇、丙酮都试过,但是提取回收率都不高,而且RSD好多也不行。现在正在努力思考想尝试下用混合得有机溶剂是否有用,不知各位大神对这个方法的优化有什么想法没?因为不是专业做这个的,做到现在都是一头雾水。望大神们指点!!!
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我需要找好自己的方向。。。
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陈虫虫

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by cjx521 at 2016-05-28 19:56:05
你可以试试在有机溶剂中加点挥发性酸,比如甲酸,加的的量不要过大,否则蛋白沉淀不干净,大约0.2%,如果有用的话,再具体摸一下加酸量

这个想法考虑过,加过1%、10%的乙酸试过,但是发现没什么帮助。
我需要找好自己的方向。。。
7楼2016-05-30 21:04:07
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rosegarden

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
确定不是基质效应?蛋白沉淀的提取回收率可能低,但是重现性应该不会太差,六个样本RSD应该在15%以内
坚持
2楼2016-05-26 12:07:34
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陈虫虫

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by rosegarden at 2016-05-26 12:07:34
确定不是基质效应?蛋白沉淀的提取回收率可能低,但是重现性应该不会太差,六个样本RSD应该在15%以内

重现性不好,但不会很乱 只是每次做都会有好几个RSD超过范围,特别是对碱敏感的那个物质,基质效应应该也属于优化的一部分吧?如果蛋白沉淀的干净了基质效应相对会影响小一点吧?因为在操作的过程中也确实发现用有机试剂沉淀的不是很好,上清液中还是会有一些杂质。
我需要找好自己的方向。。。
3楼2016-05-26 12:58:47
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清凉__小吊带

新虫 (小有名气)

蛋白沉淀适合水溶性物质,液液萃取适合脂溶性物质。楼主可以尝试下先蛋白沉淀再液液萃取,有可能会降低基质效应,提高重现性。另外,重现性不一定不好不一定就是样品处理方法的问题,也有可能是检测仪器本身重现性的问题。也有可能是样品处理操作人员的问题。我觉得应该综合考虑。

发自小木虫Android客户端
4楼2016-05-28 14:47:15
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