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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 关于两种不同物质的生物样品处理方法的优化
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陈虫虫

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于两种不同物质的生物样品处理方法的优化 已有3人参与

最近在做一个很纠结的实验，要从生物样品中提取三种物质出来，其中两种是弱碱性物质，脂溶性很好，一种是对碱性及敏感物质，水溶性很好，现在采取蛋白沉淀法，用甲醇、乙腈、乙醇、丙酮都试过，但是提取回收率都不高，而且RSD好多也不行。现在正在努力思考想尝试下用混合得有机溶剂是否有用，不知各位大神对这个方法的优化有什么想法没？因为不是专业做这个的，做到现在都是一头雾水。望大神们指点！！！
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我需要找好自己的方向。。。
1楼 2016-05-26 09:40:28
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rosegarden

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
确定不是基质效应？蛋白沉淀的提取回收率可能低，但是重现性应该不会太差，六个样本RSD应该在15%以内
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坚持
2楼2016-05-26 12:07:34
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陈虫虫

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by rosegarden at 2016-05-26 12:07:34
确定不是基质效应？蛋白沉淀的提取回收率可能低，但是重现性应该不会太差，六个样本RSD应该在15%以内

重现性不好，但不会很乱 只是每次做都会有好几个RSD超过范围，特别是对碱敏感的那个物质，基质效应应该也属于优化的一部分吧？如果蛋白沉淀的干净了基质效应相对会影响小一点吧？因为在操作的过程中也确实发现用有机试剂沉淀的不是很好，上清液中还是会有一些杂质。
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我需要找好自己的方向。。。
3楼2016-05-26 12:58:47
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清凉__小吊带

新虫 (小有名气)
蛋白沉淀适合水溶性物质，液液萃取适合脂溶性物质。楼主可以尝试下先蛋白沉淀再液液萃取，有可能会降低基质效应，提高重现性。另外，重现性不一定不好不一定就是样品处理方法的问题，也有可能是检测仪器本身重现性的问题。也有可能是样品处理操作人员的问题。我觉得应该综合考虑。

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4楼2016-05-28 14:47:15
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cjx521

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以试试在有机溶剂中加点挥发性酸，比如甲酸，加的的量不要过大，否则蛋白沉淀不干净，大约0.2％，如果有用的话，再具体摸一下加酸量

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5楼2016-05-28 19:56:05
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陈虫虫

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 清凉__小吊带 at 2016-05-28 14:47:15
蛋白沉淀适合水溶性物质，液液萃取适合脂溶性物质。楼主可以尝试下先蛋白沉淀再液液萃取，有可能会降低基质效应，提高重现性。另外，重现性不一定不好不一定就是样品处理方法的问题，也有可能是检测仪器本身重现性的 ...

为了排除仪器的问题我们用同一个样品重复多次进样并且不同时间进样，仪器总体还是比较稳定的。蛋白沉淀后再萃取具体要怎么操作呢？比如100血浆加400u甲醇沉淀后继续萃取上清液还是沉淀呢？
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我需要找好自己的方向。。。
6楼2016-05-30 21:03:24
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陈虫虫

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cjx521 at 2016-05-28 19:56:05
你可以试试在有机溶剂中加点挥发性酸，比如甲酸，加的的量不要过大，否则蛋白沉淀不干净，大约0.2％，如果有用的话，再具体摸一下加酸量

这个想法考虑过，加过1%、10%的乙酸试过，但是发现没什么帮助。
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我需要找好自己的方向。。。
7楼2016-05-30 21:04:07
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陈虫虫

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cjx521 at 2016-05-28 19:56:05
你可以试试在有机溶剂中加点挥发性酸，比如甲酸，加的的量不要过大，否则蛋白沉淀不干净，大约0.2％，如果有用的话，再具体摸一下加酸量

还加过0.05%的
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我需要找好自己的方向。。。
8楼2016-05-30 21:04:33
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清凉__小吊带

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 陈虫虫 at 2016-05-30 21:03:24
为了排除仪器的问题我们用同一个样品重复多次进样并且不同时间进样，仪器总体还是比较稳定的。蛋白沉淀后再萃取具体要怎么操作呢？比如100血浆加400u甲醇沉淀后继续萃取上清液还是沉淀呢？...

萃取上清液。就是把上清液当成血浆，正常进行液液萃取操作。其实沉淀蛋白以后不需要分离出来，涡旋以后直接进行液液萃取操作就可以了。

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9楼2016-05-31 08:07:30
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