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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 体液直接PCR产生引物二聚体，小老板拒绝承认是Primer dimer
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ttt7788

新虫 (正式写手)
引用回帖:
27楼: Originally posted by xincer at 2016-05-28 20:35:30
楼主你好。你们也是做血浆的游离核酸吗？ 能问一下你们的核酸提取试剂盒或者protocol吗？

我DNA  RNA 都做过，你要提取DNA 还是RNA 的pro？
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xincer
31楼2016-05-30 15:39:49
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viki_MDK

银虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
3楼: Originally posted by ttt7788 at 2016-05-25 23:32:45
你也觉得下面很强的条带不是二聚体？  而模糊的是?...

M旁边不是有对照吗？还不能说明问题？
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32楼2016-05-30 15:40:59
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ttt7788

新虫 (正式写手)
引用回帖:
25楼: Originally posted by armigera at 2016-05-28 14:38:59
最下面模糊的是引物二聚体。没加模板的阴性对照组都有这条带（第二泳道），建议楼主检查所用试剂是否污染～

本人又用其他几种primer测试了一下， 产物长度分别为630, 300 bp。  都会得到最下端的产物。  所有试剂都换新的，移液器也换了新的，不会是污染
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33楼2016-05-30 19:10:08
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ttt7788

新虫 (正式写手)
引用回帖:
26楼: Originally posted by 边木殇 at 2016-05-28 14:57:36
我实验的时候也是，产物不足100bp的时候条带很模糊，特别像二聚体。楼上说的好，直接切胶测序，或者做一组不加模板的对照，楼主最好再检查下俩对引物的dimer值是不是有的过高

ladder 旁边的NTC就是不加模板的对照。  用primer blast 查过， primer dimer calculator 算过，没有非特异性产物以及引物二聚体
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34楼2016-05-30 19:11:44
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xincer

木虫 (小有名气)
★
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送红花一朵
引用回帖:
31楼: Originally posted by ttt7788 at 2016-05-30 15:39:49
我DNA  RNA 都做过，你要提取DNA 还是RNA 的pro？...

RNA的  wangxincer@163.com  非常感谢啦，我提出来的效果都不好。。

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35楼2016-05-30 23:36:51
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
切胶测序就可以了。
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36楼2016-05-31 01:58:04
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wywei2012

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by ttt7788 at 2016-05-25 23:32:45
你也觉得下面很强的条带不是二聚体？  而模糊的是?...

一定不是引物二聚体

发自小木虫IOS客户端
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37楼2016-06-10 11:13:07
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