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痞子无敌

金虫 (正式写手)

[求助] 菌落PCR问题。同样的引物，以基因组为模板有条带；以菌落为模板，无 已有1人参与

问题详述：
       最近在酿酒酵母里做两个基因（A,B）的单敲。明明两个基因的引物对为：Primer A,Primer B.以基因组为模板时，有条带，较清晰；以敲除菌A,B为模板，同时以未敲除菌（原始菌）为模板做对照，A基因的可以有条带，同时对照也有较浅但可以看见的条带，但是B基因PCR结果一片空白，包括对照也没有条带。求大神分析原因
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当你当你的眼睛眯着笑
1楼 2016-05-25 19:28:34
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痞子无敌

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-05-25 20:41:29
菌液PCR一般都是针对大肠杆菌的吧？酵母属于真核，基因组比较复杂，一般要提取基因组，再PCR的。再说，酵母细胞壁很坚固的，菌落PCR，能破壁吗？从你结果来看，可能是能破壁。不过，也不排除假阳性。要是发文章，估 ...

酵母菌落PCR是没有问题的，这是经过检验的。假阳性肯定是有的，只是什么东西都P不出来，这不正常
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当你当你的眼睛眯着笑
3楼2016-05-26 09:01:04
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
痞子无敌: 金币+2, ★有帮助, 十分感谢 2016-06-09 11:23:53
菌液PCR一般都是针对大肠杆菌的吧？酵母属于真核，基因组比较复杂，一般要提取基因组，再PCR的。再说，酵母细胞壁很坚固的，菌落PCR，能破壁吗？从你结果来看，可能是能破壁。不过，也不排除假阳性。要是发文章，估计你是要提基因组，才有说服力。
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2楼2016-05-25 20:41:29
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