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痞子无敌

金虫 (正式写手)

[求助] 菌落PCR问题。同样的引物,以基因组为模板有条带;以菌落为模板,无 已有1人参与

问题详述:
       最近在酿酒酵母里做两个基因(A,B)的单敲。明明两个基因的引物对为:Primer A,Primer B.以基因组为模板时,有条带,较清晰;以敲除菌A,B为模板,同时以未敲除菌(原始菌)为模板做对照,A基因的可以有条带,同时对照也有较浅但可以看见的条带,但是B基因PCR结果一片空白,包括对照也没有条带。求大神分析原因
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当你当你的眼睛眯着笑
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痞子无敌

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-05-25 20:41:29
菌液PCR一般都是针对大肠杆菌的吧?酵母属于真核,基因组比较复杂,一般要提取基因组,再PCR的。再说,酵母细胞壁很坚固的,菌落PCR,能破壁吗?从你结果来看,可能是能破壁。不过,也不排除假阳性。要是发文章,估 ...

酵母菌落PCR是没有问题的,这是经过检验的。假阳性肯定是有的,只是什么东西都P不出来,这不正常
当你当你的眼睛眯着笑
3楼2016-05-26 09:01:04
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
痞子无敌: 金币+2, 有帮助, 十分感谢 2016-06-09 11:23:53
菌液PCR一般都是针对大肠杆菌的吧?酵母属于真核,基因组比较复杂,一般要提取基因组,再PCR的。再说,酵母细胞壁很坚固的,菌落PCR,能破壁吗?从你结果来看,可能是能破壁。不过,也不排除假阳性。要是发文章,估计你是要提基因组,才有说服力。
2楼2016-05-25 20:41:29
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