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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 大鼠粪便总DNA琼脂糖凝胶电泳
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小马哥学营养

金虫 (初入文坛)

[求助] 大鼠粪便总DNA琼脂糖凝胶电泳 已有1人参与

研一刚刚开始做实验，使用天根的试剂盒提取大鼠粪便总DNA，测得的OD260/280均在1.9-2.1之间，浓度在200-580ng/ μL之间，学姐们都说结果还可以，但是没用pcr之前的琼脂糖凝胶电泳总是跑不出来好的条带。0.5*的TBE作缓冲液，1 ℅胶， 条件80v，100v，150v都试过，时间在20分钟，30分钟，60分钟也都试过，0.5*的TBE作缓冲液。但是没有改善，求各位大神指点。
        究竟是DNA样品不行？还是跑电泳条件不行？

大鼠粪便总DNA琼脂糖凝胶电泳
IMG20160509174436.jpg


大鼠粪便总DNA琼脂糖凝胶电泳-1
IMG20160525104938.jpg
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1楼 2016-05-25 17:04:20
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小马哥学营养

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by basler at 2016-05-25 17:47:49
请问，肠道会有核酸酶吗？我不清楚，总dna，里面会不会有很多核酸碎片，另外还有更多肠道代谢细胞，都会有很多碎片，所以造成拖尾严重！

正常的话环境里DNA的酶很少，之前师姐有在人粪便里提取的，做法基本和我一样，但是跑出来的条带特别好，亮亮的一条，同样都是按照试剂盒，我的就不行，按照您的意思？有蛋白质污染么？
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3楼2016-05-25 19:25:47
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zengxianti

木虫 (小有名气)
rna污染，用rna酶处理试试

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5楼2016-05-26 18:56:20
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qhiv6

新虫 (小有名气)
纯DNA的od比值应该是1.8，RNA是2.0，既然比值这么高，里面肯定有RNA污染的

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6楼2016-05-26 21:41:02
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匿名

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2楼2016-05-25 17:47:49
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匿名

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4楼2016-05-25 23:03:04
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原来，是这样

金虫 (小有名气)
用1×的TBE然后0.8%的胶试试，加大电压，快速跑，跑久了更容易降解

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7楼2016-05-27 19:14:06
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noric4

铁杆木虫 (正式写手)

学习者
个人认为应该也是RNA污染，你再去除下RNA，条带大的话琼脂糖少些，话说我们一般用TAE（虽然其实影响都不大）

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前进前进前进进
8楼2016-05-28 07:30:22
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Robinho6082

银虫 (小有名气)
换一款好的粪便DNA提取试剂盒，MP Biomedicals的就不错

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9楼2016-05-28 07:34:51
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平凡的世界8

新虫 (初入文坛)
我跑的连总条带都没有 请问你解决了没

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10楼2016-11-19 09:35:16
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