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小马哥学营养

金虫 (初入文坛)

[求助] 大鼠粪便总DNA琼脂糖凝胶电泳 已有1人参与

研一刚刚开始做实验,使用天根的试剂盒提取大鼠粪便总DNA,测得的OD260/280均在1.9-2.1之间,浓度在200-580ng/ μL之间,学姐们都说结果还可以,但是没用pcr之前的琼脂糖凝胶电泳总是跑不出来好的条带。0.5*的TBE作缓冲液,1 ℅胶, 条件80v,100v,150v都试过,时间在20分钟,30分钟,60分钟也都试过,0.5*的TBE作缓冲液。但是没有改善,求各位大神指点。
        究竟是DNA样品不行?还是跑电泳条件不行?

大鼠粪便总DNA琼脂糖凝胶电泳
IMG20160509174436.jpg


大鼠粪便总DNA琼脂糖凝胶电泳-1
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小马哥学营养

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by basler at 2016-05-25 17:47:49
请问,肠道会有核酸酶吗?我不清楚,总dna,里面会不会有很多核酸碎片,另外还有更多肠道代谢细胞,都会有很多碎片,所以造成拖尾严重!

正常的话环境里DNA的酶很少,之前师姐有在人粪便里提取的,做法基本和我一样,但是跑出来的条带特别好,亮亮的一条,同样都是按照试剂盒,我的就不行,按照您的意思?有蛋白质污染么?
3楼2016-05-25 19:25:47
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zengxianti

木虫 (小有名气)

5楼2016-05-26 18:56:20
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qhiv6

新虫 (小有名气)

纯DNA的od比值应该是1.8,RNA是2.0,既然比值这么高,里面肯定有RNA污染的

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6楼2016-05-26 21:41:02
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匿名

用户注销 (著名写手)

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2楼2016-05-25 17:47:49
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匿名

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4楼2016-05-25 23:03:04
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原来,是这样

金虫 (小有名气)

用1×的TBE然后0.8%的胶试试,加大电压,快速跑,跑久了更容易降解

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7楼2016-05-27 19:14:06
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noric4

铁杆木虫 (正式写手)

学习者

个人认为应该也是RNA污染,你再去除下RNA,条带大的话琼脂糖少些,话说我们一般用TAE(虽然其实影响都不大)

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前进前进前进进
8楼2016-05-28 07:30:22
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Robinho6082

银虫 (小有名气)

换一款好的粪便DNA提取试剂盒,MP Biomedicals的就不错

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9楼2016-05-28 07:34:51
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平凡的世界8

新虫 (初入文坛)

我跑的连总条带都没有 请问你解决了没

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10楼2016-11-19 09:35:16
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