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Yuanfang_818

金虫 (小有名气)

[求助] 乳酸菌感受态细胞制备 已有2人参与

请教一下,有知道乳酸菌感受态细胞怎么自己做的吗?我做的是乳酸乳球菌,其他的也可以~

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sh727986091

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Yuanfang_818: 金币+3, ★★★很有帮助 2016-05-28 00:50:46
2楼2016-05-25 12:46:09
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Yuanfang_818

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sh727986091 at 2016-05-25 12:46:09
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2882400&_from=share&u=2336612&h=e0517803

先谢谢了,好好看看~

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3楼2016-05-25 13:52:15
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wanglei512

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Yuanfang_818: 金币+2, ★★★很有帮助 2016-05-28 00:51:36
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励热心应助! 2016-05-28 07:55:33
乳酸菌感受态很好做,基本和大肠做法差不多,主要是洗液不同,网上应该有很多,你需要注意的是乳酸菌要多洗两遍,每次都要弃干净,应为培养液离子很多,洗不干净容易爆杯,还有就是感受态用完不要用上次剩下的感受态划线做感受态,要用最初纯化好的细胞做感受态,如果不这样,乳酸菌感受态细胞会退化,希望可以帮助到你
4楼2016-05-27 20:36:59
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finland

新虫 (小有名气)

我的一点电转化心得就是,细胞浓度要高(很关键),甘氨酸多洗两便(洗掉离子),外源片段浓度也要高。然后点击不击穿就好。总会长出来几个转化子的。
另外乳酸菌很多是厌氧的,如果没有二氧化碳培养条件的话,采用倾倒平板法比涂布法培养更容易获得转化子。

我做实验很粗放的,经常击穿了也能获得转化子,呵呵。可能与质粒片段大小有关吧。  我做的外源质粒是3kb到6kb之间。
5楼2016-05-27 22:06:59
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Yuanfang_818

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wanglei512 at 2016-05-27 20:36:59
乳酸菌感受态很好做,基本和大肠做法差不多,主要是洗液不同,网上应该有很多,你需要注意的是乳酸菌要多洗两遍,每次都要弃干净,应为培养液离子很多,洗不干净容易爆杯,还有就是感受态用完不要用上次剩下的感受态 ...

谢谢,记下了~

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6楼2016-05-27 22:57:30
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Yuanfang_818

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by finland at 2016-05-27 22:06:59
我的一点电转化心得就是,细胞浓度要高(很关键),甘氨酸多洗两便(洗掉离子),外源片段浓度也要高。然后点击不击穿就好。总会长出来几个转化子的。
另外乳酸菌很多是厌氧的,如果没有二氧化碳培养条件的话,采用 ...

谢谢,我也要做电转,记下了~

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7楼2016-05-27 22:59:50
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finland

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by Yuanfang_818 at 2016-05-27 22:59:50
谢谢,我也要做电转,记下了~
...

甘氨酸洗还有一个作用是降低细胞膜厚度,刚才忘说了。

另外乳球菌转化子筛选争取用红霉素抗性,卡纳可能假阳性会高一点。电击电压也很关键,记得是比大肠杆菌高(膜厚)。2.4kv or 2.2 kv?记不清楚了,可以查文献。
8楼2016-05-28 02:06:26
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学之理

铁虫 (初入文坛)

楼主,你的乳酸菌感受态细胞做好了嘛?
9楼2016-07-26 15:35:01
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海之骄子79

新虫 (初入文坛)

楼主,可不可以赠送或者交换乳酸乳球菌,非常感谢

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10楼2017-11-07 19:53:11
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