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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 乳酸菌感受态细胞制备
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Yuanfang_818

金虫 (小有名气)

[求助] 乳酸菌感受态细胞制备 已有2人参与

请教一下，有知道乳酸菌感受态细胞怎么自己做的吗？我做的是乳酸乳球菌，其他的也可以～

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1楼 2016-05-25 12:08:10
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sh727986091

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Yuanfang_818: 金币+3, ★★★很有帮助 2016-05-28 00:50:46
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2882400&_from=share&u=2336612&h=e0517803

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2楼2016-05-25 12:46:09
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Yuanfang_818

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sh727986091 at 2016-05-25 12:46:09
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2882400&_from=share&u=2336612&h=e0517803

先谢谢了，好好看看～

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3楼2016-05-25 13:52:15
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wanglei512

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Yuanfang_818: 金币+2, ★★★很有帮助 2016-05-28 00:51:36
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励热心应助！ 2016-05-28 07:55:33
乳酸菌感受态很好做，基本和大肠做法差不多，主要是洗液不同，网上应该有很多，你需要注意的是乳酸菌要多洗两遍，每次都要弃干净，应为培养液离子很多，洗不干净容易爆杯，还有就是感受态用完不要用上次剩下的感受态划线做感受态，要用最初纯化好的细胞做感受态，如果不这样，乳酸菌感受态细胞会退化，希望可以帮助到你
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4楼2016-05-27 20:36:59
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finland

新虫 (小有名气)
我的一点电转化心得就是，细胞浓度要高（很关键），甘氨酸多洗两便（洗掉离子），外源片段浓度也要高。然后点击不击穿就好。总会长出来几个转化子的。
另外乳酸菌很多是厌氧的，如果没有二氧化碳培养条件的话，采用倾倒平板法比涂布法培养更容易获得转化子。

我做实验很粗放的，经常击穿了也能获得转化子，呵呵。可能与质粒片段大小有关吧。  我做的外源质粒是3kb到6kb之间。
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5楼2016-05-27 22:06:59
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Yuanfang_818

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wanglei512 at 2016-05-27 20:36:59
乳酸菌感受态很好做，基本和大肠做法差不多，主要是洗液不同，网上应该有很多，你需要注意的是乳酸菌要多洗两遍，每次都要弃干净，应为培养液离子很多，洗不干净容易爆杯，还有就是感受态用完不要用上次剩下的感受态 ...

谢谢，记下了～

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6楼2016-05-27 22:57:30
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Yuanfang_818

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by finland at 2016-05-27 22:06:59
我的一点电转化心得就是，细胞浓度要高（很关键），甘氨酸多洗两便（洗掉离子），外源片段浓度也要高。然后点击不击穿就好。总会长出来几个转化子的。
另外乳酸菌很多是厌氧的，如果没有二氧化碳培养条件的话，采用 ...

谢谢，我也要做电转，记下了～

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7楼2016-05-27 22:59:50
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finland

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Yuanfang_818 at 2016-05-27 22:59:50
谢谢，我也要做电转，记下了～
...

甘氨酸洗还有一个作用是降低细胞膜厚度，刚才忘说了。

另外乳球菌转化子筛选争取用红霉素抗性，卡纳可能假阳性会高一点。电击电压也很关键，记得是比大肠杆菌高（膜厚）。2.4kv or 2.2 kv？记不清楚了，可以查文献。
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8楼2016-05-28 02:06:26
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学之理

铁虫 (初入文坛)
楼主，你的乳酸菌感受态细胞做好了嘛？
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9楼2016-07-26 15:35:01
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海之骄子79

新虫 (初入文坛)
楼主，可不可以赠送或者交换乳酸乳球菌，非常感谢

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10楼2017-11-07 19:53:11
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