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Yuanfang_818

金虫 (小有名气)

[求助] 乳酸菌感受态细胞制备 已有2人参与

请教一下,有知道乳酸菌感受态细胞怎么自己做的吗?我做的是乳酸乳球菌,其他的也可以~

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finland

新虫 (小有名气)

我的一点电转化心得就是,细胞浓度要高(很关键),甘氨酸多洗两便(洗掉离子),外源片段浓度也要高。然后点击不击穿就好。总会长出来几个转化子的。
另外乳酸菌很多是厌氧的,如果没有二氧化碳培养条件的话,采用倾倒平板法比涂布法培养更容易获得转化子。

我做实验很粗放的,经常击穿了也能获得转化子,呵呵。可能与质粒片段大小有关吧。  我做的外源质粒是3kb到6kb之间。
5楼2016-05-27 22:06:59
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finland

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by Yuanfang_818 at 2016-05-27 22:59:50
谢谢,我也要做电转,记下了~
...

甘氨酸洗还有一个作用是降低细胞膜厚度,刚才忘说了。

另外乳球菌转化子筛选争取用红霉素抗性,卡纳可能假阳性会高一点。电击电压也很关键,记得是比大肠杆菌高(膜厚)。2.4kv or 2.2 kv?记不清楚了,可以查文献。
8楼2016-05-28 02:06:26
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