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质粒双酶切后目的条带比较暗，求助改进方法
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求助各位大神，小弟近期正在做质粒双酶切的实验，用的是NEB的内切酶，但是酶切后目的条带比较暗，请问各位大神如何解决啊…… （1）这个质粒用的是T3载体，空载体3kb左右，一共四个目的基因，都在75obp左右，胶图和酶的说明书如下图 （2）25微升体系中，我加入DNA的量按照质粒浓度加入了0.5g，前三个泳道道是用的APa1和Hind3,由于buffer不同，NEB的网站Double Digest Recommendations for ApaI + HindIII给的建议是25℃下用ApaI在CutSmart®缓冲液中消化，再加入HindⅢ和提高温度至37℃，我给25度消化15分钟，37度消化1小时；第四个泳道用的是Nhe1和Hind3，我在2.1®缓冲液中37度消化了一个小时，之后就电泳，上样量为2微升，目的条带就是这样暗。 （3）由于条带比较暗我电泳完之后，再次37度消化了过夜，结果并没有什么变化。  0521.jpg  IMG_20160522_161002.jpg@biostar2009@飞约疯人院@youlinglyw@wizardfan |
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