| 查看: 949 | 回复: 9 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
guoxingjun2008金虫 (正式写手)
|
[交流]
关于测序的问题！！
|
||
|
现在提取DNA要去测序，我们的程序是这样的： 首先提取DNA，电泳检测； 然后PCR扩增 再把PCR扩增产物连接到T载体，接着转化感受态细胞，之后涂板，挑取白色菌落后就送去测序！ 请做过这方面的朋友，看看实验步骤有没有什么问题！ 谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
招收生物学/细胞生物学调剂
已经有4人回复
-
一志愿武汉理工，总分321，英一数二，求老师收留。
已经有5人回复
-
324求调剂
已经有8人回复
-
284求调剂
已经有12人回复
-
348求调剂
已经有3人回复
-
329求调剂
已经有7人回复
-
求调剂，一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕
已经有4人回复
-
考研调剂
已经有9人回复
-
304材料求调剂
已经有4人回复
-
一志愿郑大085600，310分求调剂
已经有3人回复
月月大可
木虫 (著名写手)
- BioEPI: 2
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 3272.1
- 散金: 1393
- 红花: 17
- 帖子: 1674
- 在线: 295.7小时
- 虫号: 549127
- 注册: 2008-04-20
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
|
在平板上长出菌落后一定要挑去出来进行验证。不管你是用蓝白斑筛选还是用抗生素来筛选。 我们所使用的T载体都是在pUC质粒及基础上进行改造的出来的。生物制品公司把pUC质粒酶切开后在两端加上末端是T的接头，记住接头的添加率并非是百分之百！ 平板筛选是可以使用菌落PCR也可以使用酶切验证。菌落PCR比较快，便于进行大量转化子的筛选，但是存在出现假阳性的可能性，使用菌落PCR一定做好阴性对照。酶切验证是很可靠的一种方法，但是你如果使用的是那种没有酶切位点的T载体就无法使用酶切法进行验证。 得到阳性克隆后在送公司测序前最后进行一次划线分离，确定你送去测序的是单克隆，当然从平板上挑去的但菌落大多数时候是单克隆但非绝对，如果你遇上不是单克隆的情况，你测序的峰会不好，影响你的测序结果！ 测序现在大多数都是交给公司来做了，一个反应几十块钱，测序完发到你邮箱。快速方便。自己测序好像还得买试剂盒。 个人观点，仅供参考！ |
8楼2008-11-10 12:59:54
WANGZHONGAC
至尊木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 11369.5
- 帖子: 362
- 在线: 19.5小时
- 虫号: 229276
- 注册: 2006-03-25
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2008-10-31 17:27:22
guoxingjun2008
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 979.9
- 散金: 136
- 帖子: 372
- 在线: 74.5小时
- 虫号: 553723
- 注册: 2008-05-04
- 专业: 生物化学
3楼2008-10-31 17:53:28
chinosaur
木虫 (正式写手)
求购IQ卡
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3126.4
- 散金: 50
- 红花: 3
- 帖子: 717
- 在线: 142.4小时
- 虫号: 257498
- 注册: 2006-06-04
- 性别: GG
- 专业: 计算机软件
4楼2008-11-09 11:14:45
