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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

[交流] 关于测序的问题!!

现在提取DNA要去测序,我们的程序是这样的:
  首先提取DNA,电泳检测;
  然后PCR扩增
  再把PCR扩增产物连接到T载体,接着转化感受态细胞,之后涂板,挑取白色菌落后就送去测序!

  请做过这方面的朋友,看看实验步骤有没有什么问题!
谢谢!
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zhaoxiag

银虫 (小有名气)

我一般是挑抗性平板上单菌落提质粒,然后酶切验证,再加上个菌液PCR,再挑选正确的去测序,这样子准确率会高些,如果直接挑菌落去测序,要是碰上假阳性怎么办?感觉那样子就象在碰运气一样不太妥
7楼2008-11-09 23:05:28
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WANGZHONGAC

至尊木虫 (正式写手)

挑的白色菌落应该还要鉴定一下吧
2楼2008-10-31 17:27:22
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

我也认为是要把白色菌落挑取,提质粒鉴定一下,但是师姐说不用.因为我们做的这个不是蓝白板筛选,绝对不会有篮板出现,所以我现在也是不太懂,大家给我好好讲讲,把测序的步骤和过程给讲解一下吧,谢谢!
3楼2008-10-31 17:53:28
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chinosaur

木虫 (正式写手)

求购IQ卡

引用回帖:
Originally posted by WANGZHONGAC at 2008-10-31 17:27:
挑的白色菌落应该还要鉴定一下吧

我觉得这位仁兄说的对
挑的白色菌落也应该PCR鉴定一下,如果是用来表达蛋白还可以小量表达一下然后检测蛋白

我们用的也是抗生素挑选,不是蓝白斑

[ Last edited by chinosaur on 2008-11-9 at 11:15 ]
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4楼2008-11-09 11:14:45
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