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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于测序的问题！！
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

[交流] 关于测序的问题！！

现在提取DNA要去测序，我们的程序是这样的：
  首先提取DNA，电泳检测；
  然后PCR扩增
  再把PCR扩增产物连接到T载体，接着转化感受态细胞，之后涂板，挑取白色菌落后就送去测序！

  请做过这方面的朋友，看看实验步骤有没有什么问题！
谢谢！
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1楼 2008-10-31 17:05:41
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sunjiali2005

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by WANGZHONGAC at 2008/10/31 17:27:
挑的白色菌落应该还要鉴定一下吧

对
应该PCR后跑个胶看一下，还可以根据设计的酶切位点做一下酶切鉴定
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孙家利
6楼2008-11-09 19:08:39
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WANGZHONGAC

至尊木虫 (正式写手)
挑的白色菌落应该还要鉴定一下吧
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2楼2008-10-31 17:27:22
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)
我也认为是要把白色菌落挑取，提质粒鉴定一下，但是师姐说不用.因为我们做的这个不是蓝白板筛选，绝对不会有篮板出现，所以我现在也是不太懂，大家给我好好讲讲，把测序的步骤和过程给讲解一下吧，谢谢！
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3楼2008-10-31 17:53:28
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chinosaur

木虫 (正式写手)

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引用回帖:
Originally posted by WANGZHONGAC at 2008-10-31 17:27:
挑的白色菌落应该还要鉴定一下吧

我觉得这位仁兄说的对
挑的白色菌落也应该PCR鉴定一下，如果是用来表达蛋白还可以小量表达一下然后检测蛋白

我们用的也是抗生素挑选，不是蓝白斑

[ Last edited by chinosaur on 2008-11-9 at 11:15 ]
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4楼2008-11-09 11:14:45
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