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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 关于包涵体蛋白的处理和纯化
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liuwukang

新虫 (小有名气)

[求助] 关于包涵体蛋白的处理和纯化 已有1人参与

bl21原核表达，问题如下:
1.假如蛋白是以包涵体形式存在，那么蛋白的量是否和菌的量有关呢，因为前期实验看诱导效果的时候只用了50ML菌液破碎，发现诱导后目的蛋白在sds page上的条带并不是那么的明显，不像别人做的有很粗的一个条带
2.包涵体用尿素处理后除了目的条带其他条带也很多，这正常吗？其他的一般都是哪些蛋白？
3.后期准备用的纯化柱需要用盐酸胍处理包涵体，这样和用尿素处理的差别大吗？

@hc-material @gyesang 发自小木虫Android客户端
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1楼 2016-05-18 18:04:31
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.蛋白量当然与菌量有关。但单位菌量含的蛋白量与表达量直接关联。破碎后上清和沉淀分别跑SDS-PAGE看那个目的蛋白多。
2.包涵体是一个复杂的混合物，用变形剂溶解后，除目的蛋白外，肯定会有其他蛋白，比如一些糖蛋白，还有其他一些物质，比较糖，核酸等。
3.用盐酸胍，还是脲处理包涵体那个效果好，与蛋白种类，本身性质有关，不能一概而论。祝顺利。
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2楼2016-05-20 11:09:58
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liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2016-05-20 11:09:58
1.蛋白量当然与菌量有关。但单位菌量含的蛋白量与表达量直接关联。破碎后上清和沉淀分别跑SDS-PAGE看那个目的蛋白多。
2.包涵体是一个复杂的混合物，用变形剂溶解后，除目的蛋白外，肯定会有其他蛋白，比如一些糖蛋 ...

那一般iptg的使用浓度在1mM以下会对菌有明显毒性从而影响蛋白表达吗？因为最近几个实验都感觉表达效果不太行，而我用的iptg浓度已经提高到0.3 到0.4mM左右了

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3楼2016-05-20 18:32:36
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hc-material

专家顾问 (职业作家)
表达量，出与IPTG量有关外，与其它的，比如诱导温度，诱导时间，诱导剂加入时间，菌种本身都有关系的，要多做对比试验，找到最有诱导条件

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4楼2016-05-20 23:49:16
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