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liuwukang

新虫 (小有名气)

[求助] 关于包涵体蛋白的处理和纯化 已有1人参与

bl21原核表达,问题如下:
1.假如蛋白是以包涵体形式存在,那么蛋白的量是否和菌的量有关呢,因为前期实验看诱导效果的时候只用了50ML菌液破碎,发现诱导后目的蛋白在sds page上的条带并不是那么的明显,不像别人做的有很粗的一个条带
2.包涵体用尿素处理后除了目的条带其他条带也很多,这正常吗?其他的一般都是哪些蛋白?
3.后期准备用的纯化柱需要用盐酸胍处理包涵体,这样和用尿素处理的差别大吗?

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hc-material

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.蛋白量当然与菌量有关。但单位菌量含的蛋白量与表达量直接关联。破碎后上清和沉淀分别跑SDS-PAGE看那个目的蛋白多。
2.包涵体是一个复杂的混合物,用变形剂溶解后,除目的蛋白外,肯定会有其他蛋白,比如一些糖蛋白,还有其他一些物质,比较糖,核酸等。
3.用盐酸胍,还是脲处理包涵体那个效果好,与蛋白种类,本身性质有关,不能一概而论。祝顺利。
2楼2016-05-20 11:09:58
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liuwukang

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2016-05-20 11:09:58
1.蛋白量当然与菌量有关。但单位菌量含的蛋白量与表达量直接关联。破碎后上清和沉淀分别跑SDS-PAGE看那个目的蛋白多。
2.包涵体是一个复杂的混合物,用变形剂溶解后,除目的蛋白外,肯定会有其他蛋白,比如一些糖蛋 ...

那一般iptg的使用浓度在1mM以下会对菌有明显毒性从而影响蛋白表达吗?因为最近几个实验都感觉表达效果不太行,而我用的iptg浓度已经提高到0.3 到0.4mM左右了

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3楼2016-05-20 18:32:36
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

表达量,出与IPTG量有关外,与其它的,比如诱导温度,诱导时间,诱导剂加入时间,菌种本身都有关系的,要多做对比试验,找到最有诱导条件

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4楼2016-05-20 23:49:16
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