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矜天

木虫 (正式写手)

[交流] 什么鬼,切好质粒放冰箱-20°C还会自连?

最近做了个电转,发现从冰箱拿出来的,切好的质粒转化居然长了好多蓝斑。一个半月前做过差不过一样的实验,当时并没有这种现象。

注:
质粒是从takara买的载体pHSG299。
连接体系用的也是takara的T4连接酶。
碱性磷酸酶用的是takara的BAP。
内切酶用的是Thermo的BamHI。

事情是这样的:
一个半月前,从takara买来了载体pHSG299,打算建库用,所以做了BamHI酶切、去磷酸化等预实验,顺便验了感受态的效率。
当时做的是化转,结果如下。
什么鬼,切好质粒放冰箱-20°C还会自连?
可以看到感受态OK,各种测试都OK。

然而就这两天,我又拿这些当初保存的质粒出来转化作为对照,情况就开始不对了。
这次做的是电转,结果如下。
什么鬼,切好质粒放冰箱-20°C还会自连?-1
这次除了保证了感受态的质量,其他的。。。


我想问各位有见过这样的情况吗?单酶切的质粒放在-20°C,包括做了去磷酸化的,还能够自连?
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轩辕漪

禁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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7楼2016-05-16 23:13:37
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查看全部 18 个回答

kaobo2012

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
矜天: 金币+1 2016-05-15 00:06:00
是不是酶的问题?你可以跑个电泳看看,到底切开了没有。
2楼2016-05-14 23:20:18
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矜天

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-05-14 23:20:18
是不是酶的问题?你可以跑个电泳看看,到底切开了没有。

跑过,切开了的

发自小木虫Android客户端
3楼2016-05-15 00:05:53
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匿名

用户注销 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖仅楼主可见
4楼2016-05-16 07:18:22
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