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矜天木虫 (正式写手)
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什么鬼，切好质粒放冰箱-20°C还会自连？
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最近做了个电转，发现从冰箱拿出来的，切好的质粒转化居然长了好多蓝斑。一个半月前做过差不过一样的实验，当时并没有这种现象。 注： 质粒是从takara买的载体pHSG299。 连接体系用的也是takara的T4连接酶。 碱性磷酸酶用的是takara的BAP。 内切酶用的是Thermo的BamHI。 事情是这样的： 一个半月前，从takara买来了载体pHSG299，打算建库用，所以做了BamHI酶切、去磷酸化等预实验，顺便验了感受态的效率。 当时做的是化转，结果如下。  可以看到感受态OK，各种测试都OK。 然而就这两天，我又拿这些当初保存的质粒出来转化作为对照，情况就开始不对了。 这次做的是电转，结果如下。  这次除了保证了感受态的质量，其他的。。。 我想问各位有见过这样的情况吗？单酶切的质粒放在-20°C，包括做了去磷酸化的，还能够自连？ |
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