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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 什么鬼，切好质粒放冰箱-20°C还会自连？
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矜天

木虫 (正式写手)

[交流] 什么鬼，切好质粒放冰箱-20°C还会自连？

最近做了个电转，发现从冰箱拿出来的，切好的质粒转化居然长了好多蓝斑。一个半月前做过差不过一样的实验，当时并没有这种现象。

注：
质粒是从takara买的载体pHSG299。
连接体系用的也是takara的T4连接酶。
碱性磷酸酶用的是takara的BAP。
内切酶用的是Thermo的BamHI。

事情是这样的：
一个半月前，从takara买来了载体pHSG299，打算建库用，所以做了BamHI酶切、去磷酸化等预实验，顺便验了感受态的效率。
当时做的是化转，结果如下。
什么鬼，切好质粒放冰箱-20°C还会自连？
可以看到感受态OK，各种测试都OK。

然而就这两天，我又拿这些当初保存的质粒出来转化作为对照，情况就开始不对了。
这次做的是电转，结果如下。
什么鬼，切好质粒放冰箱-20°C还会自连？-1
这次除了保证了感受态的质量，其他的。。。


我想问各位有见过这样的情况吗？单酶切的质粒放在-20°C，包括做了去磷酸化的，还能够自连？
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1楼 2016-05-14 14:38:06
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kaobo2012

木虫 (正式写手)
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矜天: 金币+1 2016-05-15 00:06:00
是不是酶的问题？你可以跑个电泳看看，到底切开了没有。
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2楼2016-05-14 23:20:18
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矜天

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-05-14 23:20:18
是不是酶的问题？你可以跑个电泳看看，到底切开了没有。

跑过，切开了的

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3楼2016-05-15 00:05:53
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匿名

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4楼2016-05-16 07:18:22
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匿名

用户注销 (正式写手)
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5楼2016-05-16 09:43:22
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轩辕漪

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矜天: 金币+3 2016-05-17 00:28:40
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6楼2016-05-16 23:11:35
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轩辕漪

禁虫 (小有名气)
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7楼2016-05-16 23:13:37
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慧洋洋

铜虫 (小有名气)
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目前还没做过酶切，看到楼主的帖子长见识了

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8楼2016-05-17 00:02:49
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矜天

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 轩辕漪 at 2016-05-16 23:13:37
没有看过电影吗，生命会寻找出路

还真没看过，哈哈哈
主要诡异的地方，是一个月前做的并没有自连，算了，不管了，多想没用，以后尽量用新处理的吧

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9楼2016-05-17 00:29:57
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
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吐槽一句
这化转的感受态效率够低的
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Let God do with it as He wills
10楼2016-05-17 09:46:57
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