应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 什么鬼，切好质粒放冰箱-20°C还会自连？
181/2返回列表12下一页
查看: 3267  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

矜天

木虫 (正式写手)

[交流] 什么鬼，切好质粒放冰箱-20°C还会自连？

最近做了个电转，发现从冰箱拿出来的，切好的质粒转化居然长了好多蓝斑。一个半月前做过差不过一样的实验，当时并没有这种现象。

注：
质粒是从takara买的载体pHSG299。
连接体系用的也是takara的T4连接酶。
碱性磷酸酶用的是takara的BAP。
内切酶用的是Thermo的BamHI。

事情是这样的：
一个半月前，从takara买来了载体pHSG299，打算建库用，所以做了BamHI酶切、去磷酸化等预实验，顺便验了感受态的效率。
当时做的是化转，结果如下。
什么鬼，切好质粒放冰箱-20°C还会自连？
可以看到感受态OK，各种测试都OK。

然而就这两天，我又拿这些当初保存的质粒出来转化作为对照，情况就开始不对了。
这次做的是电转，结果如下。
什么鬼，切好质粒放冰箱-20°C还会自连？-1
这次除了保证了感受态的质量，其他的。。。


我想问各位有见过这样的情况吗？单酶切的质粒放在-20°C，包括做了去磷酸化的，还能够自连？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-05-14 14:38:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kaobo2012

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
矜天: 金币+1 2016-05-15 00:06:00
是不是酶的问题？你可以跑个电泳看看，到底切开了没有。
赞一下 回复此楼
2楼2016-05-14 23:20:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

矜天

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-05-14 23:20:18
是不是酶的问题？你可以跑个电泳看看，到底切开了没有。

跑过，切开了的

发自小木虫Android客户端
回复此楼
3楼2016-05-15 00:05:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖仅楼主可见
赞一下
4楼2016-05-16 07:18:22
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

匿名

用户注销 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖仅楼主可见
赞一下
5楼2016-05-16 09:43:22
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

轩辕漪

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
矜天: 金币+3 2016-05-17 00:28:40
本帖内容被屏蔽
6楼2016-05-16 23:11:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

轩辕漪

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
7楼2016-05-16 23:13:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

慧洋洋

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
目前还没做过酶切，看到楼主的帖子长见识了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-05-17 00:02:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

矜天

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 轩辕漪 at 2016-05-16 23:13:37
没有看过电影吗，生命会寻找出路

还真没看过，哈哈哈
主要诡异的地方，是一个月前做的并没有自连，算了，不管了，多想没用，以后尽量用新处理的吧

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2016-05-17 00:29:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
吐槽一句
这化转的感受态效率够低的
赞一下 回复此楼
Let God do with it as He wills
10楼2016-05-17 09:46:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 矜天 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料277求调剂 +4 min3 2026-03-24 4/200 2026-03-25 15:29 by fch1983
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:38 by cocolv
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-20 4/200 2026-03-25 10:16 by allen-yin
[考研] 材料学求调剂 +6 Stella_Yao 2026-03-20 6/300 2026-03-25 00:37 by baoball
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
[考研] 材料调剂 +6 匹克i 2026-03-23 6/300 2026-03-24 21:09 by greychen00
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +6 NIFFFfff 2026-03-20 6/300 2026-03-24 21:02 by hello七七
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:46 by 星空星月
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +9 材料学257求调剂 2026-03-23 10/500 2026-03-24 07:36 by wangy0907
[考研] 327求调剂 +5 prayer13 2026-03-23 5/250 2026-03-23 22:11 by 星空星月
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分，求调剂 +5 jiajunX 2026-03-22 5/250 2026-03-23 18:07 by YMU施老师
[考研] 求调剂材料学硕080500，总分289分 5+3 @taotao 2026-03-19 21/1050 2026-03-23 10:17 by 冠c哥
[考研] 一志愿070300浙大化学358分，求调剂！ +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 一志愿东华大学化学070300，求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] 一志愿南昌大学，327分，材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 308求调剂 +3 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 3/150 2026-03-20 23:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭